اثر همزمان بيسفنول A و اپي گالوكاتچين گالات بر تمايز آزمايشگاهي سلول هاي بنيادي مزانشيم مغز استخوان موش صحرايي نر به استيوبلاست در محيط كشت

Simultaneous effect of green tea catechin and bisphenol A on differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells to osteoblast in vitro

زمينه: چاي سبز غني از اپي گالوكاتچين‌گالات است و خاصيت آنتي‌اكسيدانتي فراواني دارد كه مي‌تواند باعث افزايش ماده معدني استخوان شود. از سوي ديگر در جوامع صنعتي امروزي انسان‌ها در تماس مستقيم با آلاينده‌هاي مختلفي مثل بيسفنول A قرار دارند، كه علاوه بر مشكلات زيست محيطي، براي سلامتي انسان نيز مضر مي‌باشند. روش‌ها: در اين مطالعه پس از استخراج و كشت سلول‌هاي بنيادي مزانشيم مغز استخوان رت، سلول هاي پاساژ سوم به 13 گروه كنترل، دوزهاي مختلف بيسفنول A (250 و 1000 نانومولار) و دوزهاي مختلف اپي گالوكاتچين‌گالات (5، 10، 15، 20 و 30 ميكرومولار)+ بيسفنول A تقسيم شدند و در محيط استيوژنيك براي مدت 21 روز تيمار شدند. سپس توانايي زيستي و ميزان معدني شدن ماتريكس استخواني ارزيابي شد. براي ادامه مطالعه دوز 250 نانومولار بيسفنول A و 30 ميكرومولار اپي‌گالوكاتچين گالات انتخاب شد. تاثير همزمان بيسفنول A و اپي گالوكاتچين گالات بر ميزان تمايز استيوژنيك سلول‌ها از طريق تست هاي MTT، آليزارين رد، سنجش ميزان رسوب كلسيم داخل سلولي و خارج سلولي، ميزان فعاليت آنزيم آلكالين فسفاتاز و مورفولوژي سلول هاي تمايزيافته توسط رنگ هاي فلورسنت بررسي گرديد. يافته ها: براساس آناليز واريانس نشان داده شد كه تيمار با دوزهاي 250 و 1000 نانومولار بيسفنول A باعث كاهش توانايي زيستي و تمايز به استيوبلاست سلول هاي مغز استخوان مي شود (05/0P < ). همچنين تيمار با 30 ميكرومولار اپي‌گالوكاتچين‌گالات باعث خنثي شدن اثرات مخرب بيسفنول A بر روي سلول هاي مغز استخوان شد. نتيجه گيري: مطالعه ما نشان داد كه اپي گالوكاتچين گالات مي تواند اثرات مخرب بيسفنول A را بر سلول هاي مزانشيم جبران كند.

Background: Green tea is a rich source of Epigallocatechingallate and has many antioxidant properties that can increase bone mineral content. On the other hand, people in current industrialized societies are in direct contact with contaminants such as bisphenol A that, in addition to causing environmental problems, are harmful to human’s health. Methods: In this study, following extraction and cultivation of rat bone marrow mesenchymal stem cells, third passage cells were divided into 13 groups, control, different doses of bisphenol A (250 and 1000 nM) and different doses of Epigallocatechingallate (5, 10 , 15, 20 and 30 µM) + bisphenol A, and were treated in an osteogenic environment for 21 days. Afterward, viability and mineralization of bone matrix were assessed. To continue the study, 250 nM dose ofbisphenol A and 30 µM dose of Epigallocatchingallate were selected. Simultaneous effect of bisphenol A and Epigallocatchingallate on osteogenic differentiation of cells through MTT tests, alizarin red, evaluation of intracellular and extracellular calcium deposition content, alkaline phosphatase enzyme activity and morphology of differentiated cells was analyzed by florescent colors. Results: Based on two-way ANOVA, 250 and 1000 nM doses of bisphenol A caused a highly significant reduction in the viability of bone marrow mesenchymal stem cells (P < 0.05). Moreover, Epigallocatchingallate (30 µM) was able to reduce the destructive effect of bisphenol A on bone marrow stem cells. Conclusion: The present study showed that Epigallocatechingallat can compensate for the destructive effects of bisphenol A on mesenchymal cells.