تاثير سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال مشتق از مغز استخوان همجوار با ويتامين D3، بر عملكرد نوتروفيل‌هاي خون محيطي در رت

The Effect of Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells Pulsed with Vitamin D3 on the Function of Peripheral Blood Neutrophils in Rat

زمينه و هدف: در مطالعات پيشين به ارتباط متقابل بين سلول‌هاي نوتروفيل و سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال اشاره شده است. از طرفي، به‌نظر مي‌رسد ريزمحيطي كه سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال در آن قرار گرفته‌اند مي‌تواند بر وضعيت سلول‌هاي نوتروفيل مرتبط با آنها موثر باشد. تحقيق حاضر به‌منظور بررسي تاثير سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال مشتق از مغز استخوان همجوار با 1?,25-dihydroxyvitamin D3 بر روي قابليت‌هاي نوتروفيل‌ها انجام شد. روش بررسي: در اين مطالعه ابتدا پس از جداسازي سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال از مغز استخوان رت‌ها، اقدام به مجاورسازي سلول‌هاي مزبور با ويتامين D3 در غلظت‌هاي 50، 100 و 200 نانومولار به مدت زمان 24، 48 و 72 ساعت شد. سپس سلول‌هاي مزبور با سلول‌هاي نوتروفيل به مدت يك‌ساعت مجاور شدند. در ادامه، قابليت فاگوسيتوز با مخمر اپسونيزه، شدت انفجار تنفسي به كمك تست احيا (NBT) و ميزان زنده‌ماني به شيوه رنگ‌آميزي آكريدين اورنج/ پروپيديوم يديد در نوتروفيل‌ها ارزيابي شد. داده‌‌ها با استفاده از آزمون آناليز واريانس يك‌طرفه و تست Dunnett تجزيه و تحليل شدند. سطح معني‌داري، 05/0 > p در نظر گرفته شد. يافته‌ها: قابليت فاگوسيتوز سلول‌هاي نوتروفيل در همه تيمارها و در غلظت حداقل 100 نانومولار معني‌دار بود. شدت انفجار تنفسي همه تيمارها در غلظت حداقل 50 نانومولار به بعد، اختلاف معني‌داري را نشان داد. همچنين ويتامين D3 در غلظت حداقل 50 نانومولار منجر به افزايش قابليت سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال در حفظ بقاي سلول‌هاي نوتروفيل شد (05/0p < ). نتيجه‌گيري: در مجموع به‌نظر مي‌رسد تيمار سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال مغز استخوان با ويتامين D3 موجب تقويت عملكرد سلول‌هاي مزانشيمال در افزايش بقا، قابليت فاگوسيتوز و انفجار تنفسي سلول‌هاي نوتروفيل مي‌گردد.

Background and Objectives: In previous studies, it was indicated that there is an interaction between neutrophils and mesenchymal stem cells. On the other hand, it seems that the microenvironment of mesenchymal stem cells can affect the status of their related neutrophils. The present study was carried out to investigate the effect of bone marrow-derived mesenchymal stem cell pulsed with 1?, 25-dihydroxyvitamin D3 on neutrophils functions. Methods: In the present study, at first, after isolation of mesenchymal stem cells from bone marrow of rats, these cells were pulsed with 50,100 and 200 nanomolar of vitamin D3 for 24, 48, and 72h. Then, mesenchymal stem cells co-cultured with neutrophils for 1 hour. Then, they were evaluated for phagocytosis activity against opsonized yeast, respiratory burst by NBT reduction assay, and viability by acridine orange/propidium iodide staining. The data were analyzed using one-way analysis of variance and Dunnett tests. Significance level was considered to be p < 0.05. Results: Phagocytosis ability of neutrophils in all treatments was significant in the minimum concentration of 100 nanomolar. Respiratory intensity of respiratory burst of all the treatments showed significant difference in minimum concentration of 50 nanomolar. Furthermore, vitamin D3 at the minimum concentration of 50 nanomolar caused a significant increase in the mesenchymal stem cells ability for the survival of neutrophils (p < 0.05). Conclusion: Altogether, it seems that the treatment of bone marrow derived mesenchymal stem cells with vitamin D3 potentiates the function of mesenchymal stem cells in the increase of survival, phagocytic ability and respiratory burst of neutrophil.