شناسايي مولكولي كورينه باكتريوم مينوتيسيموم در ضايعات پوستي مشكوك به اريتراسما به روش PCR

Molecular Identification of Corynebacterium minutissimum in Skin Lesions Suspicious for Erythrasma by the PCR method

هدف: اريتراسما عفونت سطحي مزمن نواحي چين‏دار بدن است. در حال حاضر عـامل اريتراسما را به روش معمول آزمايش مستقيم به‏‏صورت رنگ‏آميزي بلودومتيلن يا با پتاس 10 درصد از طريق مشاهده باسيل‏هاي رشته‏اي دراز تشخيص مي‏دهند. در مواردي در بيماران مشكوك به اريتراسما، اشكال غير معمول مشاهده مي‏شود كه تشخيص بيماري را دچار مشكل مي‏كند. هدف از اين مطالعه، معرفي روش PCR به‏منظور تشخيص قطعي كورينه باكتريوم مينوتيسيموم عامل بيماري اريتراسما است. مواد و روش‏ها: در اين مطالعه كه در طول سال‏هاي 92-91 انجام شد، تعداد 100 تراشه پوستي مشكوك به اريتراسما، از آزمايشگاه‏هاي قارچ‏شناسي پزشكي در تهران جمع‏آوري شد، نمونه‏ها به سه روش آزمايش مستقيم، كشت و روش PCR بررسي شد. DNA به روش فنل كلروفرم تغيير يافته استخراج شد و واكنش PCR با آغازگرهاي طراحي شده انجام گرفت، سپس تعدادي از محصولات PCR تعيين توالي شد. همچنين حساسيت و اختصاصيت روش PCR با آزمايش مستقيم و كشت مقايسه شد. نتايج: در اين تحقيق، از تعداد كل 100 نمونه، تعداد 25 نمونه توسط PCR و 13 نمونه توسط آزمايش مستقيم و 23 نمونه توسط كشت از نظر كورينه باكتريوم مينوتيسيموم مثبت شد. نتيجه تعيين توالي وجود اين باكتري را تاييد نمود. حساسيت و اختصاصيت روش PCR در مقايسه با آزمايش مستقيم به‏ترتيب 100 درصد و 2/86 درصد بود. همچنين حساسيت و اختصاصيت اين روش در مقايسه با كشت به‏ترتيب 100 درصد و 4/97 درصد محاسبه شد. نتيجه‏گيري: اين مطالعه نشان داد كه روش PCR، در مقايسه با روش مستقيم و كشت، حساسيت بالاتري در شناسايي كورينه باكتريوم مينوتيسيموم دارد، روش مولكولي حاضر تمامي نمونه‏هايي كه داراي اشكال معمول و شاخص اين باكتري بود را تاييد نمود، اما برخي از نمونه‏هاي داراي اشكال غير معمول را تاييد و برخي را تاييد ننمود كه معرف اهميت روش مولكولي در تشخيص بيماري و نياز به اين روش در تشخيص اريتراسما ست.

Objective: Erythrasma is a chronic superficial infection of the intertriginous areas. Most laboratories use methylene blue stain and 10% KOH smear to identify Corynebacterium minutissimum (C. minutissimum) by direct observation of filamentous bacilli. Occasionally atypical forms can be seen that create problems in diagnosis. This study aims to use the polymerase chain reaction (PCR) method in order to definitively identify C. minutissimum as an agent of erythrasma. Methods: This research was performed during 2013 on 100 skin scrapings suspicious for erythrasma which were obtained from various medical mycology laboratories in Tehran. Samples were tested by three methods - direct examination, culture and PCR. DNA was extracted by the modified phenol-chloroform method after which PCR was performed using designed primers. We sequenced some of the PCR products. The sensitivity and specificity of the PCR method was compared to the direct and culture examinations. Results: Of the 100 samples, there were 25 positive samples according to PCR analysis, 13 positive by direct examination and 23 that cultured positive. DNA sequencing results showed the presence of C. minutissimum. The PCR method in comparison with direct examination had a sensitivity of 100% and a specificity of 86.2%. The study also showed that the PCR method in comparison with culture had a sensitivity of 100% and a specificity of 97.4%. Conclusion: This study showed that the PCR method in comparison with the direct method and culture had a higher sensitivity in the detection of C. minutissimum. The present PCR method confirmed all typical and some of the atypical forms of C. minutissimum which indicated the importance of this method in the definitive diagnosis of erythrasma.