جداسازي و شناسايي رابدوويروس عامل ويرمي بهاره كپور از ماهي سفيد درياي خزر (Rutilusfrisiikutum ) پس از مواجه سازي گوارشي و انتقال افقي

Isolation and identification of Spring Viremia of Carp virus from the Caspian white fish, Rutilusfrisiikutum, after oral and horizontal transmission challenge models

بيماري ويرمي بهاره كپور ماهيان يك عفونت رابدوويروسي است كه باعث خونريزي حاد و ويرمي واگيردار در گونه‌هاي مختلف خانواده كپورماهيان مي‌شود.در اين مطالعه ميزان حساسيت ماهي سفيد درياي خزربه ويروس عامل اين بيماريبررسي گرديد.در اين مدل تجربي، 90 قطعه بچه ماهي سفيد به طور تصادفي به ششگروه مساوي در دو دسته سه تايي (3-1) Aو (3-1) Bتقسيم شدند كه به صورت دو تيمار انتقال افقي و گوارشي با دو تكرار مورد مطالعه قرار گرفتند.به منظور مواجه‏سازي به روش انتقال افقي،سه قطعه ماهي سفيد كه قبلاً به شيوه تزريق داخل صفاقي با محلول حاوي ويروس آلوده شدهبودند، به هر آكواريوم اضافه شدند.براي مواجه‌سازي گوارشي، ماهيان با گرانول‌هاي غذايي آغشته به محلول حاوي ويروستغذيه شده و به آكواريوم‌هاي مربوطه منتقل گرديدند.ماهيان به مدت شش هفته از نظر بروز تغييرات رفتاري و علايم باليني بررسي شده و در صورت بروز علايم باليني و تلفات، بلافاصله جهت آزمايش‌هاي ويروس‌شناسيو آزمايش مولكولي(RT-PCR) نمونه‏برداريشدند. همچنين، در پايان دوران مواجه‌سازي از ماهيان زندهنمونه‏برداري صورت گرفت.جداسازي ويروس با تلقيح هوموژن بافتي ماهيان بيمار به سلول‌هاي تيره EPCانجام شد و تشخيص ويروس به روش آنتي بادي درخشان غيرمستقيم صورت گرفت.بر اساس نتايج، مواجه سازي به روش انتقال افقي منجر به 57 درصد و مواجه سازي گوارشي منجر به 10 درصد تلفات گرديد.آزمايشRT-PCR بر روي بافت ماهيان تلف شده هر دو تيمارمنجر به شناسايي باند محصول RT-PCRگرديد، در حالي كه انجام اين آزمايش بر روي بافت ماهيان بقا يافته منجر به شناسايي ژنوم SVCV در ماهيان بقا يافته تيمار انتقال افقي گرديد. بر اساس نتايج، ماهي سفيد درياي خزر نسبت به SVCVحساس بوده و ميزان بروز بيماري و تلفات بستگي به مسير انتقال عفونت دارد. همچنين به نظر مي‌رسد كه در مواردي ايجاد عفونت ممكن است بدون علايم باليني بوده و ماهيان به ظاهر سالم به عنوان ناقل ويروس عمل نموده و عامل انتقال عفونت به جمعيت ماهيان سالم باشند.

Spring Viraemia of Carp (SVC) is a Rhabdovirus infection capable of inducing an acute hemorrhagic and contagious viraemia in common carp and other cyprinids. In this study, susceptibility of the Caspian Sea white fish to Spring Viraemia of Carp Virus (SVCV) was evaluated. Ninety fingerling fish were divided randomly into two groups with each group containing three replicates in separate aquaria (A1-3) and (B1-3). In order to conduct horizontal transmission model, in each related aquaria three fish were injected intraperitoneally with an inoculum containing virus. For oral virus exposure, fish were fed individually with food soaked in Eagleʹs minimal essential medium (EMEM) containing virus and then were transferred to their aquaria. Clinical signs and cumulative mortality of all fish were monitored daily for six weeks. Following observation of any clinical signs and mortalities, fish were sampled immediately for virological and molecular analysis (RT-PCR). In addition, the fish surviving at the end of experimental period were sampled. In order to isolate virus, fish tissues were homogenized and inoculated onto a monolayer of epithelium papulosumcyprini (EPC) cells. Identity of re-isolated virus was confirmed with Indirect Fluorescence Antibody Test (IFAT). According to the results horizontal transmission challenge model caused 57% of mortality while 10% of mortality observed in the fish of oral transmission challenge model. Inoculation of EPC cells using tissue homogenates prepared from dead fish induced CPE. IFAT analysis on CPE positive cells detected SVCV antigen as bright greenish dots inside EPC cells. In addition, RT-PCR analysis on tissue samples from fish that survived from virus exposure revealed presence of SVCV nucleic acid in the fish survived from horizontal transmission challenge model. According to the results, Caspian white fish is experimentally susceptible to SVCV infection and there may be variability in the degree of susceptibility to the virus depending on route of infection. It seems that SVCV, but also SVCV infection may result in no clinical signs and apparently healthy fish may serve as a reservoir of the virus, transmitting infection to healthy population of fish.