تعيين فعاليت سلولازي آكتينوميست‌هاي گرما‌دوست موجود در كمپوست قارچ خوراكي به روش ارزيابي با كاغذ صافي

Determination cellulase activity of mushroom compost thermophilic actinomycetes by filter paper assay

آكتينوميست‌ها، به ويژه گونه‌هاي گرمادوست، به عنوان اصلي‌ترين اجزاي ميكروفلور كمپوست قارچ خوراكي دكمه‌اي شناخته ‌شده‌اند. اين گروه از باكتريها در توليد آنزيمهاي تجزيه‌كننده و آنتي‌بيوتيكها توانايي زيادي دارند. آكتينوميست‌هاي گرمادوست از مراحل مختلف تهيه كمپوست‌ با تكنيك رقيق‌سازي جداسازي شدند و كشت خالص آنها تهيه گرديد. از نتايج تستهاي بيوشيميايي و تجزيه و تحليل الگوي برشي ژن 16SrRNA براي شناسايي جدايه‌ها استفاده شد. توانايي تجزيه سلولز در هر كدام از جدايه‌ها با استفاده از روش ارزيابي با كاغذ صافي در دما و ‌pH‌‌‌‌هاي مختلف مورد بررسي قرار گرفت. حداكثر فعاليت آنزيمي براي هر كدام از جدايه‌ها بر اساس ميلي‌گرم گلوكز آزاد شده از يك ميلي‌ليتر عصاره ناخالص تعيين شد. بر اساس نتايج به دست ‌آمده، دما و pH بهينه‌ فعاليت آنزيمي براي جدايه‌هاي مختلف متفاوت بود. در دماي 45 درجه سانتي گراد جدايه 23 با ميانگين 10/1 ميلي‌گرم در ميلي‌ليتر، فعال ترين ايزوله سلولازي معرفي شد. اين ايزوله‌ها جهت بهينه‌سازي كمپوست قارچ به كار برده شدند.

One of the most important substrate for producing of the edible white button mushrooms is compost. Thermophilic actinomycetes are one of the most important microflora in composting. So these actinomycetes were isolated from different steps in composting process by dilution technique. The isolates were incubated at 40°C. The chalky colonies were selected and transformed to new solid media to prepare pure culture of each isolate. Bacterial isolates were identified based on biochemical tests and amplified 16SrRNA restriction analysis technique. Ability of the isolates to break down cellulose, was assessed by using Filter paper in different temperature and pH. Maximum enzyme activity for each isolate were measured based on milligrams of glucose released from one milliliters extract. The isolates with high cellulase activity were screened for determination of the optimum pH and temperature. Isolate 23 had 1/10 mg/ml enzyme activity and it demonstrated a higher cellulase activity at 45°C. These isolates was applied for improvement quality compost.