تعيين هويت انگل ليشمانيا با استفاده از تكنيك PCR-RFLP در بيماران و جوندگان مخزن ليشمانيوز جلدي در بخش مركزي استان قم سال1389

Identification of Leishmania species in patients and reservoir rodents using PCR–RFLP in the central county of Qom province in 2010

چكيده زمينه و هدف: ليشمانيوز جلدي يك معضل مهم بهداشتي در بسياري از مناطق ايران به شمار مي‎رود. اين بيماري به طور عمده در استان قم از بخش مركزي شامل دهستان‎هاي قنوات و قمرود گزارش مي‎شود. اين مطالعه با هدف تعيين هويت نوع انگل در انسان و جوندگان به منظور شناسايي سيماي اپيدميولوژيك بيماري و ارايه برنامه كنترل در سال 1389 انجام شده است. مواد و روش‎ها: در اين مطالعه مقطعي، گسترش ميكروسكوپي 45 نمونه انساني و 30 نمونه جونده صيد شده از مجاورت روستاهاي انتخابي از دهستان‎هاي قمرود و قنوات واقع در بخش مركزي استان قم مورد آزمايش قرار گرفت كه 15 مورد انساني و 1 مورد جونده اسمير مثبت داشتند. سپس DNA انگل از روي لام‎ها، استخراج و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ليشمانيا جهت تكثير قطعه ITS1 با روش PCR آزمايش شدند و محصولات PCR تحت هضم آنزيمي (HaeIII) قرار گرفت. يافته‎ها: در مجموع 15 نمونه انساني و 1 نمونه از جونده گونه مريونس ليبيكوس، مورد آزمايش PCR-RFLP قرار گرفتند. پس از الكتروفورز محصولات واكنش مشخص گرديد كه انگل موجود در لام‎هاي انساني و جونده مريونس ليبيكوس، ليشمانيا ماژور (عامل بيماري ليشمانيوز جلدي روستايي) مي‎باشد. نتيجه‎گيري: با توجه به نتايج به دست آمده روش مولكولي PCR-RFLP روشي مناسب جهت تعيين گونه انگل ليشمانيا در لام‎هاي رنگ آميزي شده با گيمسا كه از انسان و مخزن حيواني گرفته شده، مي‎باشد و از مزاياي اين روش اين است كه بدون انجام تعيين توالي ژن‎ها، تشخيص گونه‎هاي انگل ليشمانياي مولد بيماري امكان پذير خواهد بود. ضمن اين كه تكنيك PCR-RFLP روشي با حساسيت و ويژگي بالا بوده و مي‎تواند در طي 24 ساعت علاوه بر تشخيص ليشمانيوز، نوع گونه انگل را تعيين هويت نمايد. واژگان كليدي: سالك، ليشمانيا، واكنش زنجيره‎اي پليمراز

Abstract Background: Cutaneous leishmaniasis is a health problem in many areas of Iran. Cutaneous leishmaniasisis reported mostly in the central county of Qom province, including Ghanavat and Qomrood villages. This study was done to identify parasite species in human and rodents in order to illustrate the epidemiologic picture of the disease and provide an appropriate control program in 2010. Materials and Methods: This cross-sectional study was done on microscopic smears of 45 human samples and rodents samples hunted around Ghanavat and Qomrood villages in the central county of Qom province in 2010. In total,15 human samples and one hunted rodent sample were positive. In this study, the DNA of the parasites were extracted from the slides and analyzed by Leishmania specific premiers using ITS1 PCR-amplification (Internal Transcribed Spacer1). PCR (Polymerase Chain Reaction) products were digested by Haelll enzyme. Results: Overall, 15 human samples and one rodent sample from Merioneslibycus species were evaluated by PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). After electrophoresis, it was demonstrated that the parasite was Leishmania major in both human and rodent species. Conclusion: PCR-RFLP technique is an effective method to determine Leishmania parasite species in Geimsa stained slides from human and rodent reservoirs. One of the advantages of this technique is that it is possible to recognize the pathogen species of Leishmania parasite without gene sequencing. Besides, PCR-RFLP technique is a method of quite high sensitivity and specificity which can identify parasite species in addition to the diagnosis of leishmaniasis within 24 hours. Keywords: Cutaneous leishmaniasis, Leishmania, PCR-RFLP