تشخيص كريپتوسپوريديوم و ميكروسپوريدياهاي روده‎اي در افراد مبتلا به HIV/AIDS با روش‎هاي رنگ آميزي و PCR بر روي ژن 16srRNA ميكروسپوريديا

Diagnosis of Cryptosporidium and intestinal Microsporidia in HIV/AIDS patients with staining and PCR methods on 16srRNA gen

چكيده زمينه و هدف: روز به روز بر گزارش عفونت‎هاي ميكروسپوريديايي افزوده مي‎شود و بعضي از جنس‎ها مانند انتروسيتوزون بينيوسي و انسفاليتوزون اينتستيناليس از عوامل مهم ايجاد كننده اسهال مزمن به ويژه در بيماران HIV مثبت مي‎باشند. در اين مطالعه از روش‎هاي رنگ آميزي تريكروم-آبي اصلاح شده (MTS)، اسيد فست تريكروم (AFT) و PCR جهت شناسايي ميكروسپوريديا در نمونه‎هاي مدفوع به كار گرفته شد. مواد و روش‎ها: در اين مطالعه تجربي آزمايشگاهي تعداد 71 نمونه مدفوع از بيماران مبتلا به ايدز با اسهال مزمن جمع آوري و به آزمايشگاه انتقال يافت. از هر نمونه مدفوع 2 عدد لام تهيه شده و با متانول فيكس شد و با روش‎هاي MTS و AFT رنگ‎آميزي صورت گرفت و توسط سه نفر مشاهده شد. هم‎چنين از روش PCR با پرايمرهاي اختصاصي ناحيه حفاظت شده 16srRNA ميكروسپوريدياهاي روده‎اي استفاده شد. يافته‎ها: 13 بيمار(30/18 درصد) از 71 بيمار، با استفاده از دو روش رنگ‎آميزي ذكر شده از نظر ميكروسپوريديا مثبت شدند. هم‎چنين 9 بيمار(67/12 درصد) با استفاده از روش AFT از نظر كريپتوسپوريديوم مثبت گزارش شدند كه 4 مورد (63/5 درصد) از اين افراد هم‎زمان از نظر ميكروسپوريديا مثبت شناخته شده بودند. در تكنيك PCR، 16 بيمار (53/22 درصد) از نظر ميكروسپوريدياهاي روده‎اي مثبت شناخته شدند. لازم به ذكر است تمامي مواردي كه از نظر ميكروسپوريديا با استفاده از روش‎هاي رنگ‎آميزي مثبت گزارش شده بودند در تكنيك PCR نيز مثبت شناخته شدند. نتيجه‎گيري: مشاهده شد كه تكنيك PCR حساسيت بالاتري نسبت به روش‎هاي رنگ‎آميزي دارد. هم‎چنين مشاهده شد كه هر دو روش رنگ‎آميزي به يك ميزان در تشخيص ميكروسپوريديا مفيد مي‎باشند. واژگان كليدي: ايدز، كريپتوسپوريديوم، ميكروسپوريديا، PCR، رنگ‎آميزي

Abstract Background: Reports on microsporidia infections are increasing and some species, such as Enterocytozoon bieneusi and Encephalitozoon intestinalis, have become important causes of chronic malabsorptive diarrhea, especially in HIV infected patients. In this study, Modified Trichrome-Blue (MTS) and Acid-Fast Trichrome (AFT) staining methods as well as PCR technique were used for detecting microsporidia in stool specimens. Materials and Methods: In this experimental study, a total of 71 stool specimens from AIDS patients with chronic diarrhea were collected and sent to laboratory. Two slides were prepared for each stool specimen. The slides were fixed with methanol, stained with MTS and AFT stain, and read by at least three individuals. In addition, PCR with primers directed to a conserved region of the 16s rRNA of intestinal microsporidian spores was used. Results: Totally of 71 patients, 13 patients (18.30%) were positive for microsporidia by MTS and AFT stain methods. In addition, 9 patients (12.67%) were positive for cryptosporidium by AFT stain and 4 (5.63%) of them were positive for microsporidia. Furthermore, 16 patients (22.53%) were positive for intestinal microsporidiosis by PCR technique. Notably, all cases that were positive for microsporidia by staining methods were also positive for PCR technique as well Conclusion: PCR technique was more sensitive than staining methods. Also, MTS and AFT stain methods were equally useful in the diagnosis of microsporidiosis. Keywords: AIDS, Cryptosporidium, Microsporidia, PCR, Staining