مقاومت دارويي گونه هاي كانديدايي جداشده از پريتونيتهاي قارچي به روش PCR- RFLP

Drug Resistance of Candida Species Isolated from Fungal Peritonitis by PCR-RFLP Method

سابقه و هدف: پريتونيت هاي قارچي بيماري نسبتا نادري مي باشند كه با عوارض جدي اعم از ناخوشي و ضريب بالايي از مرگ و مير و حذف تصادفي بيماران از برنامه دياليز صفاقي همراه مي باشند. گونه هاي كانديدايي مهمترين عامل مسبب پريتونيت هاي قارچي در اين بيماران محسوب مي شوند. هدف از اين مطالعه جداسازي گونه هاي كانديدا از بيماران مبتلا به عفونت صفاقي به روش ملكولي و سپس تعيين تست حساسيت گونه هاي ايزوله شده نسبت به داروهاي ضد قارچي مي باشد. مواد و روشها: اين مطالعه مقطعي طي يكسال نمونه برداري (نمونه هاي صفاق) از 210 بيمار دياليز صفاقي مشكوك به عفونت صفاق شهر تهران انجام گرفت. شناسايي ايزوله ها از طريق آزمايشات ميكروسكوپي مستقيم و كشت بر روي محيط كروم آگار، كورن ميل آگار و تست لوله زايا در سرم گاوي، تست اوره آز و شناسايي بيوشيميايي از طريق كيتAPI 20 انجام گرفت. گونه هاي ايزوله شده از طريق روش مولكولي RFLP- PCR تاييد گرديدند. تست حساسيت دارويي گونه هاي كانديدايي جدا شده به روش ميكروديلوشن براث مطابق با راهنماي استاندارد NCCLS M27 انجام شد. يافته ها: از مجموع210 نمونه بررسي شده 40مورد (05/19%) براساس آزمايشات پريتونيت ميكروبي تشخيص داده شدند كه تنها 9 مورد (5/22%) پريتونيت كانديدايي بود كه مطابق با روش مولكولي RFLP- PCR جهت تاييد روش هاي فنوتيپي اشاره شده، تعيين گونه شدند. از 9 موردكانديداي جداشده 5 مورد (55%) كانديدا آلبيكنس، 1 مورد (11%) كانديدا كفير، 2 مورد (22%) كانديدا گيلرموندي و 1مورد (11%) كانديدا پاراپسيلوزيس بودند. MIC براي گونه هاي آلبيكنس (فلوسيتوزينg/mlµ 2 فلوكونازول g/mlµ 2 آمفوتريسينB g/mlµ 125/0) براي گونه هاي گيلرموندي (فلوسيتوزينg/mlµ 4 فلوكونازول g/mlµ 2 آمفوتريسينB g/mlµ 1) براي كانديدا كفير (فلوسيتوزين g/mlµ 4-2 فلوكونازول g/mlµ 1-5/0 آمفوتريسينB g/mlµ1-5/0) و براي گونه پاراپسيلوزيس (فلوسيتوزين g/mlµ 0.5 فلوكونازول g/mlµ 1 آمفوتريسين B g/mlµ 0.5) بود. نتيجه گيري: براساس نتايج اين مطالعه شناسايي دقيق گونه هاي مختلف كانديدا آلبيكنس و غير كانديدا آلبيكانس مسبب پريتونيت هاي كانديدايي پس از دياليز صفاقي ضروري مي باشد.

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Fungal peritonitis is a relatively rare disease with serious complications in peritoneal dialysis patients and is associated with significant morbidity and mortality. Candida species are the most common cause of fungal peritonitis. The objective of this study was to isolate the Candida species in the patients with peritoneal dialysis by molecular methods, and thus to determine their drug resistance. METHODS: In this cross-sectional study, sampling (peritoneal samples) was carried out on 210 suspicious patients with peritonitis after peritoneal dialysis in Tehran, Iran in 2010. Species identification was done by direct microscopic tests, culture on Chromagar and Corn meal agar, Germ tube test in bovine serum, Urease test, and biochemical identification with the API 20 kit. Identification of isolated yeasts was confirmed by PCR-RELF method. Antifungal susceptibility testing of isolated Candida species was conducted by the broth dilution method in accordance with the National Committee on Clinical Laboratory Standards guidelines [NCCLS-M27]. FINDINGS: Totally 210 samples were surveyed that 40 cases (19.05%) with microbial peritonitis were identified based on experiments, which only 9 cases (22.5%) had Candida peritonitis which determined as specific species in accordance with PCR-RFLP molecular technique for confirming phenotyping methods. Among these 9 cases of isolated candida species, 5 cases of them (55%) were C. albicans, 1 case (11%) was C. Kefyr and 2 cases (22%) were C. guilliermondii and also 1 case (11%) was C. parapsilosis. The MIC determined by antifungal susceptibility testing were: C. albicans (Amphotericin B=0.125 µg/ml, Fluconazole=2 µg/ml, 5- Flucytosine=2 µg/ml), C. guilliermondii (Amph B=1 µg/ml; Flu=2 µg/ml, 5- Fluc=4 µg/ml), C. Kefyr (Amph B=0.5-1 µg/ml, Flu=0.5- 1 µg/ml, 5- Fluc=2-4 µg/ml) and C. parapsilosis (Amph B =0.5 µg/ml, Flu =1 µg/ml, 5- Fluc=0.5g/ml). CONCLUSION: Accurate identification of Candida albicans and non-Candida albicans species cases of Candida peritonitis in patients with peritoneal dialysis is necessary. KEY WORDS: Candida, Fungal peritonitis, Drug resistance, Minimum inhibitory concentration, Polymerase chain reaction, Restriction fragment length polymorphism.