بررسي ايمني‌زايي واكسن كانديد هدفمند و چند اپي‌توپي 1-HIV در موش‌هاي بالب سي

Immunogenicity evaluation of targeted multi-epitopic HIV-I candidate vaccine in Balb/c mice

چكيده زمينه و هدف: تحويل مستقيم آنتي‌ژن به سلول‌هاي دندريتيك موجب تقويت پاسخ‌هاي ايمني مي‌شود و راهكاري مناسب در مبارزه عليه پاتوژن‌هاي موتاژني نظير HIV مي‌باشد. هدف اين مطالعه بررسي پاسخ‌هاي ايمني حاصل از تحويل مستقيم پروتيين نوتركيب چنداپي‌توپي tat/pol/gag/env ويروس 1-HIV با كمك آنتي بادي منوكلونال عليه 205-DEC موجود در سطح سلول‌هاي دندريتيك موش جهت تقويت پاسخ‌هاي ايمني است. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي- آزمايشگاهي، پروتيين نوتركيب حاصل از بيان پلاسميد pET23a-HIVtop4 حاوي سكانس 20-1Tat، 610-577ENV، 190-150Pol، 323-296ENV، 186-158Gag و 61-44Tat در سويه اشرشياكلي 21BL به عنوان واكسن مدل استفاده شد. به منظور به‌كارگيري ويژگي‌هاي سلول‌هاي دندريتيك در روند ايمني زايي، پروتيين نوتركيب به روش شيميايي به آنتي‌بادي عليه گيرنده 205-DEC كونژوگه گرديد. موش‌هاي بالب سي به صورت زيرپوستي با فرم كونژوگه يا غيركونژوگه (كنترل) پپتيد 4HIVtop به همراه Poly I:C به عنوان عامل بلوغ سلول‌هاي DC، ايمونيزه شدند. تكثير سلولي به روش برومو دي يوريدين، پاسخ سيتوتوكسيسيتي با اندازه‌گيري گرآنزيم B، اينترلوكين‌هاي 4 و 7، اينترفرون گاما و آنتي بادي توتال به ترتيب با روش اليزاي مستقيم و غير مستقيم سنجيده شدند. يافته‌ها: ايمونيزاسيون با پپتيد متصل به آنتي بادي عليه 205-DEC در مقايسه با گروه‌هاي كنترل موجب افزايش قابل ملاحظه در پاسخ‌هاي تكثيري، سيتوتوكسيسيتي، توليد اينترلوكين‌هاي 4 و 7، اينترفرون گاما و نيز تيتر آنتي بادي توتال گرديد. نتيجه‌گيري: تحويل مستقيم آنتي ژن پروتييني مورد نظر به سلول‌هاي دندريتيك + 205-DEC، در مقايسه با گروه‌هاي كنترل موجب افزايش قابل توجه پاسخ‌هاي ايمني مي‌شود. واژگان كليدي: 205-DEC، هدف‌گيري سلول دندريتيك، پروتيين چنداپي‌توپي نوتركيب، واكسن

Abstract Background: Delivery of antigens directly to dendritic cells enhances the immune responses to the antigen and is an attractive approach for eliciting cellular immune responses against mutagenic pathogens like HIV virus. So the aim of this study is evaluation of immune responses elicited by delivered multi-epitopic HIV-1 tat/pol/gag/env recombinant protein to dendritic cells in sito using ?DEC-205 mAb. Materials and Methods: In this study, recombinant protein expressed by pET23a-HIVtop4 plasmid including HIVtop4 sequence (Gag158-186, Pol150-190, ENV296-323, ENV577-610, Tat1-20 and Tat44-61) in BL21 E. coli cells was used as vaccine model. To exploiting dendritic cells, properties for immunization purposes, we conjugated this recombinant protein chemically to anti body against DEC-205 receptor on these cells. Balb/c mice immunized subcutaneously (s.c.) with conjugated multi-epitopic protein or un-conjugated one (as control) simultaneously with Poly I: C as dendritic cell maturation factor. Lymphocyte proliferation was measured by bromo di uridine assay, Cytotoxicity by Grenzyme B production activity, IL-4, IL-17, IFN-? cytokines production and total antibody by direct and indirect ELISA methods in order. Results: Immunization by anti DEC-205 conjugated peptide led to a significant increase in the proliferative responses of lymphocytes, production of Gr-B, IFN-?, IL-4 and IL-17 cytokines and total antibody titer in comparison with the none targeted groups. Conclusion: It is concluded that targeting of protein antigens to DEC-205+dendritic cells significantly enhances immune responses in compare to non-targeting strategies. Keywords: DEC-205, Dendritic cell targeting, Multi epitopic recombinant protein, Vaccine