شناسايي ساختار ژني سويه‌هاي بومي باكتري thuringiensis Bacillus جداسازي شده از خاك‌هاي مناطق جنگلي استان مازندران

Genetic Characterization of Native Bacillus thuringiensis Strains Isolated from Forst Soil Samples of Mazandaran Province

سويه هاي بومي (Bt) Bacillus thuringiensis از خاك هاي جنگلي مناطق مختلف استان مازندران جداسازي و ژن Cry1 عامل توليد پروتيين موثر روي حشرات، در آنها رديابي شد. از 32 نمونه خاك مورد بررسي از طريق بازدارندگي انتخابي استات سديم، 144 سويه-ي باسيلوس جداسازي گرديد. پس از كشت كلني ها، رنگ آميزي اختصاصي و شناسايي ميكروسكوپي در 63/32% از سويه ها پروتيين-هاي كريستالي مشاهده شد كه براي بسياري از حشرات سمي هستند. بررسي جدايه هاي Bt نشان داد كه در هفت جدايه، ژن Cry1 وجود دارد. آزمايش‌هاي تعيين ساختار ژني براي وجود چهار ژن Cry1A (شاملAa، Ab، Ac و Ad) و ژن‌هاي Cry1B، Cry1C، Cry1D، Cry1E، Cry1F، Cry1G، Cry1H، Cry1I، Cry1J و Cry1K با استفاده از 14 جفت آغازگر اختصاصي انجام شد. ژن هاي Cry1Ac و Cry1I در تمامي سويه ها مشاهده شد، ولي ژن هاي Cry1Aa، Cry1E و Cry1G در هيچ يك از سويه ها يافت نشدند. نتايج اين پژوهش نشان داد كه از اين شيوه‌هاي مولكولي مي توان براي رديابي سويه هاي بومي باكتري Bt كه داراي پروتيين هاي موثر روي حشرات هستند، استفاده كرد.

Native Bacillus thuringiensis (Bt) strains were isolated from forest soils samples of different regions in Mazandaran province and some encoding genes (Cry1) for insecticidal crystal proteins were detected in the isolated Bt strains. A total of one hundred forty four Bacillus strains were isolated from 32 soil samples using selective inhibitory property of sodium acetate. Insecticidal crystal proteins were detected in 32.63% of the isolates following colonies culturing, specific staining and microscopic identification. Cry1 gene was recognized in seven isolates as consequence of molecular analysis of the strains. Gene content investigation was carried out to detecting four Cry1A (Aa, Ab, Ac and Ad), Cry1B, Cry1C, Cry1D, Cry1E, Cry1F, Cry1G, Cry1H, Cry1I, Cry1J and Cry1K genes by using of 14 specific primers. Cry1Ac and Cry1I genes were detected in all isolates, but Cry1Aa, Cry1E and Cry1G were not entirely found in all isolates. Based on the results, the described molecular procedure can be exploited for identification of the insecticide-proteins encoding genes.