افزايش القا آپوپتوز ناشي از دوكسوروبيسين توسط ايندول تري كربينول با مهارمسير پيام دهي فاكتور هسته‌اي كاپا-B در رده سلولي لوسمي لنفوبلاستيك حاد پيش ساز سلولB (NALM-6)

Indole-3-carbinol enhances doxorubicin-induced apoptosis through suppression of NF-B in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia cell line NALM-6

چكيده زمينه و هدف: دوكسوروبيسين از خانواده آنتراسايكلين‌ها به طور گسترده براي درمان بدخيمي‌هاي خوني استفاده مي‌شود. يكي از اثرات جانبي اين داروها، فعال شدن مسير پيام دهي فاكتور هسته‌اي كاپا-B (NF-?B) مي‌باشد. NF-?B با افزايش بيان ژن‌هاي بقا سلولي باعث كاهش پاسخ مورد انتظار مي‌شود. در اين مطالعه اثر ايندول تري كربينول به عنوان مهار كننده NF-?B بر تنظيم اين فاكتور هسته‌اي و بيان ژن‌هاي هدف آن XIAP و Survivin در سلول‌هاي لوسمي لنفوبلاستيك حاد پيش ساز سلول B (BCP- ALL) بررسي شده است. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي سلول‌هاي NALM-6 با غلظت‌هاي مختلف ايندول تري كربينول تيمار و سپس با دوكسوروبيسين 125 نانو مولار مجاور شدند. ميزان آپوپتوز با رنگ آميزي پروپيديوم يديد و انكسين-V به كمك تكنيك فلوسيتومتري تعيين شد. تغييرات در پروتيين‌هاي p65 ،XIAP و Survivin در سلول‌هاي مجاور شده با ايندول تري كربينول و دوكسوروبيسين به كمك وسترن بلات مطالعه و بررسي داده‌ها با آزمون تي زوجي انجام شد. يافته‌ها: ايندول تري كربينول باعث افزايش معني‌دار(05/0p < ) آپوپتوز در سلول‌هاي NALM-6 تحت تيمار با دوكسوروبيسين و ايندول تري كربينول در مقايسه با سلول‌هايي كه تنها با دوكسوروبيسين مجاور شده بودند، مي‌شود. هم‌چنين اثر مهاري ايندول تري كربينول بر تجمع هسته‌اي p65 و جلوگيري از افزايش بيان XIAP و Survivin القا شده با دوكسوروبيسين به صورت معني‌دار(05/0p < ) مشهود مي‌باشد. نتيجه‌گيري: ايندول تري كربينول به عنوان يك تركيب طبيعي مي‌تواند باعث افزايش اثربخشي داروهاي خانواده آنتراسيكلين از طريق مهار مسير NF-?B شود. اين درمان تركيبي مي‌تواند در بهبود BCP- ALL با مسير فعال NF-?B مفيد واقع شود. واژگان كليدي: ايندول تري كربينول، دوكسوروبيسين، لوسمي لنفوبلاستيك حاد، NF-?B

Abstract Background: Doxorubicin is a chemotherapeutic agent still in widespread use in hematologic malignancies. A side effect of anthracyclines such as doxorubicin is the activation of nuclear factor-?B (NF-?B), a potent inducer of antiapoptotic genes, which may blunt the therapeutic efficacy of the drugs. In this study, the effect of indole -3-carbinol (I3C) on the activation NF-?B and the anti-apoptotic genes whose expression is regulated by NF-?B was assessed in NALM-6 cells Materials and Methods: NALM-6 cells were preincubated with various concentrations of I3C and then treated with doxorubicin. Cellular DNA content assay and Annexin V-FITC staining were performed by flowcytometry for evaluation of apoptosis. For assessing the effect of I3C on the expression of XIAP, survivin, and nuclear p65 proteins, NALM-6 cells were pretreated with I3C and then incubated with doxorubicin. Whole-cell and nuclear extracts were prepared for Western blot analysis. A paired t - test was conducted to evaluate the results Results: DNA histogram analysis of NALM-6 cells indicates a combination of I3C with doxorubicin significantly escalated the percentages of sub-G1 population cells compared with doxorubicin -only treated group (P 0.05). Annexin V-FITC staining also showed that cotreatment of NALM-6 cells with I3C and doxorubicin significantly increased the proportion of Annexin-V positive cells in comparison with the doxorubicin treated cells (P 0.05). The western blot analysis indicated I3C significantly inhibits both doxorubicin -induced nuclear translocation of p65 and the expression of doxorubicin-induced NF-?B target Conclusion: Our results indicated that using natural non-toxic inhibitors of NF- ?B such as I3C in combination with anthracyclines might be a rational combination therapy for BCP-ALL cells in which NF- ?B is constitutively active. Keywords: Doxorubicin, I3C, NF-?B, Pre-B acute Lymphoblastic Leukemia