بررسي فوليكول هاي آنترال تخمداني براي تعيين غلظت اسيد آلفا- لينولنيك موثر بر توانايي تكوين برون تني اووسايت هاي بز

Investigation of Antral Follicles to Determine the Effective Concentration of Alfa-Linolenic Acid on In Vitro Developmental Competence of Goat Oocytes

اسيدهاي چرب غيراشباع با چند باند دوگانه فزون بر نقش انرژي زايي با تاثير بر بافت هاي توليد مثلي از جمله اثر بر فوليكول هاي تخمدان و جسم زرد و همين طور مهيا نمودن پيش ساز هاي سنتز تركيباتي نظير استروييد ها و پروستاگلاندين ها بر توليد مثل موثر هستند. در اين مطالعه اسيد آلفا-لينولنيك (آلفالين) به محيط كشت بلوغ برون تني اووسايت هاي بز افزوده شد تا اثر آن بر توانايي تكوين آنها بررسي شود. لذا، ابتدا مايع فوليكولي از فوليكول هاي كوچك و بزرگ تخمدان هاي بز جمع آوري شد تا مقدار آلفالين آنها به روش كروماتوگرافي گازي اندازه گيري شود. نتايج اين آزمايش اوليه نشان داد كه غلظت آلفالين از فوليكول هاي كوچك (6/64 ميكرو مولار) به فوليكول هاي بزرگ (6/100 ميكرو مولار) افزايش يافت (05/0?P). سپس با توجه به غلظت آلفالين در مايع فوليكولي فوليكول هاي كوچك و بزرگ، اووسايت ها در حضور غلظت هاي صفر (شاهد)، 10 (آلفالين-10)، 50 (آلفالين-50)، 100 (آلفالين-100) و 200 (آلفالين-200) ميكرومولار كشت داده شدند. 24 ساعت پس از بلوغ برون تني، گسترش سلول هاي كومولوس اووسايت ها و راندمان رسيدن آنها به مرحله ي متافاز ميوز-2 بررسي شد. در ادامه اووسايت هاي تيماري از آلفالين كه بيشترين بلوغ برون تني را نشان داد به روش پارتنوژنز فعال شدند و درصد تسهيم و توليد بلاستوسيست آنها با گروه شاهد مقايسه شد. داده ها در هر مرحله ثبت و به روش آزمون مقايسه ي ميانگين ها و يا كاي دو با استفاده از نرم افزار SAS آناليز شدند. افزودن آلفالين به محيط كشت بلوغ برون تني اووسايت ها اثري بر گسترش سلول هاي كومولوس نداشت (05/0?P) و تنها در بيشترين غلظت (آلفالين-200) مقدار گسترش سلول هاي كومولوس را كاهش داد (05/0?P). درصد بلوغ برون تني اووسايت ها در گروه آلفالين-50 افزايش معني داري (05/0?P) را در مقايسه با گروه شاهد نشان داد (1/68% در مقابل 2/57%). افزودن 50 ميكرومولار آلفالين به محيط كشت بلوغ برون تني اووسايت ها همچنين درصد تسهيم (2/65%) و توليد بلاستوسيست (1/25%) را در مقايسه با گروه شاهد بهبود بخشيد (به ترتيب 8/52% و 7/16%، 05/0?P). به طور كلي، نتايج اين مطالعه ي نشان داد كه افزودن غلظت مناسب آلفالين به محيط كشت بلوغ برون تني مي تواند راندمان بلوغ، درصد تسهيم و توليد بلاستوسيست را در اووسايت هاي بز افزايش دهد.

Besides their role in making energy, polyunsaturated fatty acids can affect on ovarian follicles and corpus luteum by providing the precursors required for the synthesis of signaling molecules such as steroids and prostaglandins. The effects of ?-linolenic acid (ALA) on developmental competence of oocytes in goats were evaluated in this study. Initially, ALA content of follicular fluid of small and large follicles was determined using GC–mass chromatography. Our results indicated that the ALA concentration was in a range of 64.6 to 100.6 ?M for small and large follicles, respectively. Then, based on preliminary results, goat oocytes were matured in presence of 0 (Control), 10 (ALA-10), 50 (ALA-50), 100 (ALA-100) and 200 (ALA-200) ?M of ALA. Twenty four hours after in vitro maturation (IVM), oocytes in each group were evaluated for their cumulus cell expansion and also for their maturation rate. Furthermore, matured oocytes were treated for parthenogenetic activation and the cleavage and blastocyst rates of control and ALA-treated group were recorded at day 3 and 8 post-activation. Data from each stage were recorded and analyzed via Compare Means Test and/or chi-square analysis using SAS software. Supplementation of maturation media with different concentration of ALA had no effect on cumulus cell expansion except in the highest concentration (ALA-200) that decreased the cumulus cell expansion (P?0.05). Our findings indicated that maturation rate was higher (P?0.05) in ALA-50 group as compared with the control group (68.1% vs. 58.2%). Moreover, supplementation of maturation medium with 50 ?M ALA improved the cleavage rate (65.2% vs. 52.8%) and blastocyst rate (25.1% vs. 16.7%) as compared with the control group (P?0.05). Collectively, our results showed that treatment of maturation medium with optimum concentration of ALA had a beneficial effect on oocyte maturation by increasing the maturation rate and this in turn, can stimulate the embryonic development.