ايزولاسيون و شناسايي سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي مشتق از بافت پالپ و فوليكول دندان مولر سوم انسان

Isolation and characterization of mesenchymal stem cells derived from dental pulp and follicle tissue of human third molar tooth

زمينه و هدف: در دهه گذشته مطالعات متعددی جداسازی جمعيت سلول بنيادی را از منابع مختلف دندانی گزارش كرده‌اند، در حاليكه هنوز ماهيت مزانشيمی آنها مورد بحث است. هدف از مطالعه حاضر، جداسازی سلول بنيادی از پالپ و فوليكول دندان بالغ ‌انسان و تعيين ماهيت مزانشيمی آنها قبل از تمايز بر اساس معيارهايISCT  (انجمن بين المللی سلول درمانی) بود. روش بررسی: در اين مطالعه تجربی، از دندان مولر سوم افراد بالغ 25- 18 سال كه به دلايل پروفيلاكتيك يا ارتودونسی كشيده شدند، استفاده شد. دندان و فوليكول دندانی پس از كشيده شدن در دمای 4 درجه سانتيگراد در محيط RPMI 1640 حاوی آنتی بيوتيك نگهداری می‌شدند. پالپ و فوليكول دندان در شرايط كاملاً استريل تهيه و پس از ليز با mg/ml 4 محلول كلاژناز تيپ I و ديسپاز با نسبت 1:1، سلول‌ها در محيط MEM-α كشت داده شدند. سلول‌ها در پاساژ سوم با روش فلوسايتومتری از نظر بيان آنتی ژن سطحی CD34، CD45، CD73، CD90،CD105 ارزيابی شدند. يافته‌ها: مشاهده شد كه بافت پالپ و فوليكول دندان به شكل واحدهای كلونی كه غالباً حاوی جمعيتی از سلول‌های شبه فيبروبلاست بود، رشد كردند. نتايج آناليز فلوسايتومتری به دست آمده از نمونه‌ها با درجه بالايی نسبت به ماركر‌های سلول بنيادی مزانشيمی CD73، CD90 و CD105 واكنش مثبت و نسبت به ماركر‌های CD34 و CD45 كه از ماركر‌های هماتوپويتيك هستند، واكنش منفی نشان دادند. نتيجه‌گيری: در اين مطالعه نشان داده شد كه سلول‌های بنيادی تخليص شده از پالپ و فوليكول دندان مولر سوم قبل از تمايز ماهيت سلول بنيادی مزانشيمی را دارند و لذا به عنوان يك منبع با دسترسی آسان جهت تحقيقات كاربردی مرتبط با سلول بنيادی و مهندسی بافت می‌باشند.

Background and Aims: In the last decade, several studies have reported the isolation of stem cell population from different dental sources, while their mesenchymal nature is still controversial. The aim of this study was to isolate stem cells from mature human dental pulp and follicle and to determine their mesenchymal nature before differentiation based on the ISCT (International Society for Cellular Therapy) criteria.Materials and Methods: In this experimental study, intact human third molars extracted due to prophylactic or orthodontic reasons were collected from patients aged 18-25. After tooth extraction, dental pulp and follicle were stored at 4°C in RPMI 1640 medium containing antibiotics. Dental pulp and follicle were prepared in a sterile condition and digested using an enzyme solution containing 4mg/ml collagenase I and dispase (ratio: 1:1). The cells were then cultivated in α-MEM medium. Passage-3 cells were analyzed by flow cytometry for the expression of CD34, CD45, CD 73, CD90 and CD105 surface markers.Results: Dental pulp and follicle were observed to grow in colony forming units, mainly composed of a fibroblast-like cell population. Flow cytometry results showed that dental pulp and follicle are highly positive for CD73, CD90 and CD105 (mesenchymal stem cell markers) and are negative for hematopoietic markers such as CD34 and CD 45.Conclusion: In this study we were able to successfully confirm that dental pulp and follicle stem cells isolated from permanent third molars have a mesenchymal nature before differentiation. Therefore, these two sources can be considered as an easy accessible source of mesenchymal stem cells for stem cell research and tissue engineering.