توليد فاژهاي نوتركيب حاوي ژن‌هاي آنتي‌بادي اختصاصي ويروس تريستزاي مركبات

Production of recombinant phages containing specific antibody genes against Citrus tristeza virus

ويروس تريستزا يكي از عوامل بيماريزاي مركبات در دنيا به شمار مي‌رود. امروزه روش‌هاي نوين مبتني بر مهندسي آنتي بادي به عنوان راهكاري جديد در شناسايي گياهان آلوده و همچنين توليد گياهان مقاوم به بيماري‌ها مورد استفاده قرار مي‌گيرد. يكي از ابزار‌هاي مهم در توليد آنتي بادي‌هاي نوتركيب استفاده از تكنولوژي نمايش فاژي مي‌باشد. در اين تحقيق قابليت استفاده از كتابخانه فاژي حاوي ژن‌هاي آنتي بادي انساني به منظور توليد فاژ‌هاي نوتركيب حاوي قطعات آنتي بادي اختصاصي بر عليه ويروس تريستزاي مركبات با روش نمايش فاژي بررسي شد. براي اين منظور، توليد و خالص سازي پروتيين پوششي ويروس تريستزا به صورت نوتركيب انجام شد. غني سازي كتابخانه فاژي با انجام مراحل غربال گري صورت گرفت و قابليت اتصال جمعيت‌هاي اختصاصي فاژ‌ها با استفاده از آزمون‌هاي سرولوژيك بررسي شد. نتايج حاصله نشان داد كه در دور‌هاي متوالي بيوپنينگ كتابخانه، اختصاصيت فاژها افزوده شد و فاژهاي جدا شده اختصاصيت بالايي در اتصال به پروتيين پوششي ويروس داشتند. بر اساس اطلاعات موجود اين اولين گزارش از توليد آنتي بادي اختصاصي بر عليه ويروس تريستزاي مركبات با روش نمايش فاژي مي باشد.

Tristeza is one of the most destructive citrus diseases in the world. The disease is widely distributed throughout the major citrus growing area of Iran. Nowadays, new technologies are being applied for development of diagnosis tools against plant viruses. Among them, phage display has a major role in production of specific monoclonal antibodies. Present research is done due to gain specific recombinant phages against Citrus tristeza virus (CTV). For this aim, a major component of CTV coat protein was selected as an antigen and was produced in recombinant form in bacteria. Naïve phage display libraries containing single chain variable fragments (scFv) were applied for the selection of specific phages. Three rounds of biopanning were applied by using purified coat protein as a binder in immunotubes followed by the selection of specific recombinant phages by indirect ELISA. The selected phages can be used for generation of specific monoclonal antibodies. Based on our knowledge this is the first report for production of specific antibody against CTV by phage display technology.