ارزيابي اثر محافظتي كروسين بر آسيب DNA اسپرم و لقاح داخل آزمايشگاهي موش هاي نر بالغ تحت درمان با سيكلوفسفاميد

Protective Effect of Crocin on DNA Damage of Sperm and in Vitro Fertilization (IVF) in Adult Male Mice Treated with Cyclophosphamide

سابقه و هدف: استرس اكسيداتيو ناشی از عوارض جانبی شيمی درمانی با سيكلوفسفاميد موجب آسيب‌پذيری اسپرماتوزوئيدها و كاهش توان باروری می‌شود. لذا در اين مطالعه تأثير كروسين (عصاره زعفران) بر بهبود اين عوارض بررسی شد. مواد و روش‌ها: موش سوری نر بالغ در 3 گروه مساوی قرار گرفتند. گروه كنترل سرم فيزيولوژی (cc,day,IP2/0)، گروه سيكلوفسفاميد CP (mg/kg/week,‌IP15) و گروه سيكلوفسفاميد+كروسين (CP+Cr) علاوه بر سيكلوفسفاميد روزانه كروسين (mg/kg/day,IP200) را به مدت 35 روز دريافت نمودند. سپس حيوانات آسان كشی شده و ميزان مالون دی آلدئيد بيضه‌ها اندازه‌گيری شد. پس از استحصال اسپرم از دم اپيديديم ميزان شكسته شدن DNA توسط رنگ‌آميزی آكريدين اورنج محاسبه شد. پس از تحريك تخمك‌گذاری در تعداد 72 سر موش ماده بالغ، تخمك‌های جدا شده در محيط كشت HTF حاوی BSA مورد لقاح داخل آزمايشگاهی با اسپرم‌های ظرفيت يافته قرار گرفتند. ميزان لقاح و رشد جنينی گروه‌ها طی 120 ساعت ارزيابی شد. يافته‌ها: نتايج بررسی درصد لقاح داخل آزمايشگاهی اسپرم‌ها نشان از افزايش لقاح، جنين‌های دوسلولی و بلاستوسيست‌ها در گروه CP+Cr نسبت به گروه CP داشت (05/0 p<). هم‌چنين كروسين در گروه CP+Cr توانست از افزايش تعداد كل جنين‌های متوقف شده و درصد جنين‌های متوقف شده تيپ I و II و III در مقايسه با گروه CP جلوگيری نمايد (05/0 p<). كاهش ميزان مالون دی‌آلدئيد و اسپرم‌های با DNA آسيب ديده نيز در گروه CP+Cr نسبت به گروه CP مشاهده شد(05/0 p<). استنتاج: نتايج اين مطالعه توانايی كروسين در بهبود توان باروری و روند رشد جنين اوليه در حيوانات دريافت كننده سيكلوفسفاميد را نشان داد.

Background and purpose: Oxidative stress induced by cyclophosphamide (CP), a chemotherapeutic agent, causes vulnerability of sperm and declining the fertility power. Then in this study the effect of crocin (saffron extract) on amelioration of these side effects was investigated. Materials and methods: In this study 24 adult male mice were divided in three groups (n=8). Control group received normal saline (0.2 ml/day, IP), CP group received cyclophosphamide (15 mg/kg/week, IP), and CP+Cr group received crocin (200 mg/kg/day, IP) along with CP for 35 days. Then the animals were euthanized and malondialdehyde (MDA) in testis was assayed. After collection of sperm from caudate of epididymis, the rate of DNA damage was calculated by acridine orange staining. After stimulation of ovulation in 72 female adult mice, oocytes were collected and transferred in HTF medium that contained BSA. Then, in-vitro fertilization (IVF) was done with capacitated sperms. The rate of fertilization and primitive embryonic growth were evaluated for 120 hours. Results: The results showed increase in fertilization, two cell embryos and blastocysts in CP+Cr group compared to those of the CP group (P<0.05). Also, the crocin in CP+Cr group prevented the increase of total number of arrested embryos and percentage of arrested embryos type I, II, and III (P<0.05). Decrease in MDA assay and sperms with damaged DNA were observed more in CP+Cr group (P<0.05). Conclusion: This study showed the efficiency of crocin in amelioration of fertility and growth of primitive embryo in animals that received CP.