رديابي و تعيين جايگاه تاكسونوميك باكتري همزيست ولباكيا در كرم گلوگاه انار در استان فارس

Detection of Wolbachia sp. in Ectomyelois ceratoniae and determination of its taxonomical place in Fars province

سابقه و هدف: كرم گلوگاه انار، لارو شب پره اكتوميلويس سراتونيا مي باشد كه از مهم ترين آفات انار محسوب مي گردد. در حال حاضر هر گونه عمليات سم پاشي بر عليه اين آفت فاقد نتيجه بود است. يكي از روش هاي كنترل استفاده از عوامل بيولوژيك مانند ايجاد تغييرات توليد مثلي توسط باكتري ولباكيا است. اين مطالعه با هدف رديابي باكتري همزيست ولباكيا در كرم گلوگاه انار و تعيين جايگاه تاكسونوميكي آن در استان فارس انجام شد. مواد و روش ها: در اين پژوهش به صورت تصادفي 100 نمونه از انارهاي آلوده مناطق مختلف استان فارس جمع آوري گرديد. پس از استخراجDNA از تخمدان حشره، به منظور رديابي و وجود باكتري همزيست ولباكيا از روش PCR استفاده شد. پس از تعيين توالي قطعه حاصل و مقايسه آن با توالي هاي موجود در بانك ژن جهاني، جايگاه تاكسونوميكي ولباكيا با استفاده از نرم افزارهاي ‍ClustalX وTreeView تعيين گرديد. يافته ها: در اين مطالعه تنها يك جمعيت از شيراز آلودگي به ولباكيا را نشان داد. پس از تكثير ژن wsp، محصول يك قطعه 513 جفت بازي بود كه به دنبال تعيين توالي با شماره دسترسي KF007903 در بانك جهاني ژن ثبت گرديد. با مقايسه توالي به دست آمده و توالي موجود در بانك ژني مشخص گرديد كه اين باكتري در زير گروه Fur8 از گروهB متعلق به ولباكيا پيپينتيس قرار دارد. نتيجه گيري: مطالعه حاضر اولين گزارش وجود ولباكيا در كرم گلوگاه انار در ايران و جهان مي باشد. از آنجايي كه نمونه برداري در فاصله زماني تير تا شهريور ماه انجام پذيرفته است، بنابراين شيوع كم باكتري ولباكيا در مناطق مورد بررسي را مي توان به احتمال اثر دما به عنوان يك عامل بازدارنده رشد باكتري در حشرات نسبت داد.

Background & Objectives: Ectomyelois ceratoniae is one of the main pests of pomegranate. By now, no pesticides showed efficient effects on this pest. Biological control, such as changes in the reproduction ability, is a new emerged strategy for control of the population of this pest. This study was aimed to identify the symbiont bacteria in Ectomyelois ceratoniae and to determine their taxonomic classification. Materials & Methods: In this study, totally 100 infected pomegranate were randomly collected from different parts of Fars providence. After DNA extraction from ovum of the insects, a PCR approach was used to identify any symbiont bacteria in this samples. Following sequencing of the products and their analysis on gene banks, the taxonomic classification of Wolbachia was determined using ClusalX and TreeView. Results: In this study only one sample collected from shiraz was contaminated to Wolbachia . After amplification of wsp gene, OCR produced a 513 bp fragment which is available in gene bank under accession number KF007903. Analysis of the fragment in gene bank showed that this bacterium belonged to subclass Fur8 from group B, referred to as Wolbachia pipientis. Conclusion: According to our knowledge, the present study is the first report of the presence of Wolbachia in E. ceratoniae. Since the sampling were performed through June to August, the low prevalence of the bacterium Wolbachia sp. in these area can be due to effects of temperature, which is an inhibitory factor for growth of the bacterium in the insect.