انتخاب اختصاصي فاژهاي حاوي قطعه آنتي‌بادي به كمك پروتئين A در تكنيك كتابخانه آنتي‌بادي فاژ

Protein A-Specific Enrichment of Insert-containing Phage in Antibody Phage Display Library

سابقه و هدف: تكنيك كتابخانه آنتی‌بادی فاژ يكی از قدرتمندترين روش‌های ساخت قطعات آنتی‌بادی در محيط آزمايشگاه است. با اين حال يكی از مشكلات تكنيكی در مسير انتخاب آنتی‌بادی‌های اختصاصی و عملكردی وجود فاژهای فاقد قطعه آنتی‌بادی در كتابخانه آنتی‌بادی فاژ است. هدف از اين مطالعه استفاده از قابليت اتصال كلون‌های موجود در كتابخانه آنتی‌بادی فاژ به پروتئين A برای خالص‌سازی فيزيكی فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی از فاژهای فاقد قطعه آنتی‌بادی است. مواد و روش‌ها: كتابخانه آنتی‌بادی فاژ Tomlinson طبق پروتكل مربوطه تكثير شد. انتخاب آنتی‌بادی عليه گيرنده HER2 در سطح سلول VERO انجام شد. سه چرخه panning در دو گروه صورت گرفت به صورتی كه در يك گروه قبل از هر چرخه panning فاژهای توليد شده به‌وسيله پروتئين A متصل به آگاروز خالص‌سازی شدند، در حالی كه در گروه كنترل مرحله خالص‌سازی با پروتئين A صورت نگرفت. آنتی‌بادی‌های به دست آمده در انتهای هر چرخه در دو گروه مورد مطالعه به‌وسيله PCR و phage-ELISA مورد ارزيابی قرار گرفت. يافته‌ها: نتايج آزمون PCR نشان‌دهنده افزايش قابل‌ملاحظه تعداد فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی پس از خالص‌سازی توسط پروتئين A در انتهای چرخه سوم panning (87 درصد) نسبت به گروه كنترل (41 درصد) است. بعلاوه نتايج آزمون اليزا نيز تأييد انتخاب و تكثير اختصاصی آنتی‌بادی در گروه فاژ خالص شده با پروتئين A است. استنتاج: اين مطالعه اهميت خالص‌سازی فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی را برای توليد و انتخاب آنتی‌بادی‌های اختصاصی را در تكنيك كتابخانه آنتی‌بادی فاژ نشان می‌دهد.

Background and purpose: Antibody phage display library is a powerful in vitro technology for production of recombinant antibody fragments against a wide variety of antigens. However, the presence of insert-free clones in the phage libraries limited the specific enrichment of antibody fragments in many studies. The aim of this study was to protein A-aided recovery of insert-containing phages in antibody phage display library. Materials and Methods: Tomlinson antibody library was prepared according to the standard protocol. Three rounds of panning were performed in two independent groups on VERO/HER2 cells, considering a step of protein A-aided phage precipitation at the end of each round only in one group. The efficiency of this method was evaluated on the selected clones using PCR and phage-Elisa. Results: The results of PCR showed that 87% of clones contained insert after three rounds of panning using protein A-recovered phages while in the control group only 41% of clones contained insert. Also, the results of phage-ELISA showed specific enrichment of anti-HER2 antibodies in protein A-treated group. Conclusion: This method provided a simple and effective way for selective enrichment of antibody fragments in the phage display antibody libraries.