ايجاد سازواره هاي ژني جديد به منظور بيان ژن هورمون رشد شترمرغ در سيستم هاي پروكاريوتي و يوكاريوتي

Generation of new gene constructs for expression of ostrich growth hormone gene in prokaryotic and eukaryotic systems

سابقه و هدف: رشد مناسب شترمرغ به هورمون رشد آن و تغذيه بستگي دارد. هورمون رشد شترمرغ يك پلي پپتيد است كه موجب تحريك رشد و تكثير سلول ها مي شود. هدف از اين مطالعه همسانه سازي و توليد دو سازواره ژني به منظور بيان هورمون رشد شترمرغ در سيستم هاي پروكاريوتي و يوكاريوتي مي باشد. مواد و روش ها: در اين پژوهش، RNA از غده هيپوفيز شترمرغ تخليص شد و cDNA آن به روش رونوشت برداري معكوس تهيه گرديد. cDNA حاصل، به روش همسانه سازي T/A در پلاسميد TOPO كلون شد. سپس ساب كلونينگ cDNA هورمون رشد شترمرغ در وكتورهايpcDNA3.1 و pET32 انجام شد. يافته ها: همسانه سازي cDNA هورمون رشد شترمرغ در پلاسميد TOPO با موفقيت انجام شد و روش هاي PCR و هضم اندونوكليازي، صحت كلون سازي را تاييد نمود. پس از ساب كلونينگ اين cDNA، پلاسميد هاي نوتركيب، pcDNA3.1-gh و pET32-gh حاصل گرديد و سازواره هاي حاصل توسط هضم آنزيمي تاييد گرديدند. نتيجه گيري: با استناد به نتايج به دست آمده در اين مطالعه به نظر مي رسد كه سازه هاي ژني تازه ساخته شده در اين پژوهش مي تواند به عنوان يك راهكار مناسب براي توليد صنعتي هورمون رشد شترمرغ مورد استفاده قرار گيرند.

Background & Objectives: Growth of ostrich depends to employment of growth hormone and proper nutrition. The ostrich growth hormone is a polypeptide that stimulates growth and cell reproduction. The aim of this study was to clone and generation of two new gene constructs for expression of ostrich growth hormone gene in prokaryotic and eukaryotic systems. Materials & Methods: In this study, RNA was extracted from ostrich pituitary gland and cDNAs synthesized using RT-PCR method. These cDNAs were cloned into TOPO vector based on T/A method. Then, cDNA sub-clones of ostrich growth hormone were prepared on pcDNA3.1 and pET32 vectors. Results: Cloning of ostrich growth hormone cDNA in TOPO vector was confirmed by PCR and endonuclease restriction digest. After sub-cloning of this cDNA, pcDNA3.1-gh and pET32-gh recombinant vectors were generated and the presence of genes were confirmed using restriction digestion. Conclusion: According to the results, the new recombinant vectors generated in this study can serve as an effective approach for production of the ostrich growth hormone in commercial levels.