مقايسه انجماد شيشه اي تخمدان موش نابالغ با استفاده از دو وسيله ني و كرايولاك

Compression of verification of neonatal mouse ovaries using two carriers: straw and cryolock

چكيده مقدمه : انجماد شيشه اي بافت تخمدان روشي سودمند براي حفظ باروري است و تلاش هاي زيادي براي بهبود شرايط انجمادي صورت گرفته است. هدف از اين مطالعه ارزيابي اثرات دو روش انجماد شيشه اي با استفاده از دو وسيله ني و كرايولاك بر مورفولوژي بافت تخمدان موش نابالغ بود. مواد و روش ها: در اين مطالعه كه از نوع تجربي بود، از موش ماده ي سوري 7 روزه، نژاد NMRI استفاده شد. تخمدان‌ها از بدن خارج شدند و به گروه هاي غير انجمادي، انجماد شيشه اي با ني، انجماد شيشه اي با كرايولاك و تست سميت تقسيم شدند. در گروه انجماد شيشه اي، تخمدان ها در تركيبي از 40% اتيلن گليكول، 30% فايكول 70 (W/V)، ساكارز نيم مول به مدت 5 دقيقه آبگيري شدند. سپس در ني انجمادي و كرايولاك قرار داده شدند و به درون نيتروژن مايع منتقل شدند و به مدت يك هفته نگهداري شدند. در حاليكه در گروه تست سميت براي ارزيابي سميت محلول انجمادي تخمدان ها در محلول‌هاي انجماد (EFS40) و ذوب قرار گرفتند و مرحله غوطه ور سازي در ازت مايع حذف شد. سپس مورفولوژي فوليكول هاي تخمدان با ميكروسكوپ نوري و الكتروني بررسي شدند. يافته ها: نتايج نشان داد اختلاف معناداري بين درصد فوليكول هاي بدوي و اوليه با مورفولوژي طبيعي در بين گروه ها وجود نداشت. اما درصد فوليكول پره آنترال با مورفولوژي طبيعي در روش انجمادي با ني انجمادي به طور معنادار كمتر از دو گروه ديگر مورد مطالعه بود. در بررسي هاي فراساختاري علايمي از دژنره شدن و چروكيدگي هسته سلول هاي گرانولوزا و تخمك در تعدادي از فوليكول ها پره آنترال در گروه انجمادي با روش ني مشاهده شد. نتيجه گيري: انجماد شيشه اي بافت تخمدان موش نا بالغ با استفاده از كرايولاك در مقايسه با ني مي تواند مورفولوژي طبيعي بافت تخمدان را به خوبي حفظ كند و روش مناسبي براي حفظ تخمدان باشد. كلمات كليدي: انجماد شيشه اي، ني انجمادي، كرايولاك، بافت تخمدان

ABSTRACT Background and Aim:Vitrification of ovarian tissue is an effectivemethod for preservation of fertility. Many attemptshave been made to improve cryopreservation conditions. The aim of this study was to compare the effects of two vitrification methods using two carrier systems; straw and cryolock, on the morphology of neonatal mouse ovarian tissue. Materials and Method: In this experimental study we used NMRI 7-day-old mice. Their ovaries were excised and divided into non-vitrified, vitrified with straw, vitrified with cryolock and toxicity test groups. In vitrification group, the ovaries were dehydratedin a mixture of 40% ethylene glycol, 30% ficoll 70 and sucrose (EGFS40) for 5 min.Then they were put in a plastic straw or cryolock and were placed into liquid nitrogen and stored for one week. Whereas in the toxicity test group the ovaries were exposed to the cryoprotectant EGFS40 and warming solution procedure without usingliquid nitrogen. Then we studied the morphology of ovarian follicles by means of light and electron microscopes. Result: No significant differences were observed between the groups in regard to the percentages of primordialand primary follicles with normal morphology. But the percentages of normal preantral follicles in the vitrified group using straw were significantly lowerthan those of other groups. Ultrastructural studies showed signs of degeneration andnuclear shrinkagein follicular cells insome of the preantral follicles in vitrified group using straw. Conclusion:Vitrification of ovarian tissue using cryolock is more effective for preserveration of the normal morphology of ovarian tissue, compared to vitrification by using straw. Keywords: Vitrification, Ovarian tissue, Straw, Cryolock.