ويژگي هاي مولكولي و زيستي جدايه هاي ويروس لكه حلقوي گوجه فرنگي آلوده كننده فلفل در استان تهران

Study on the molecular and biological properties of Tomato ringspot virus isolates infecting pepper plants in Tehran province

ويروس لكه حلقوي گوجه فرنگي يا Tomato ringspot virus (ToRSV) يكي از عوامل تهديد كننده كشت سبزيجات در جهان است. در طي فصول زراعي سال هاي 1391-1389 تعداد 110 نمونه برگي داراي علايم مشكوك به آلودگي ويروسي و يا بدون علايم به صورت تصادفي از فلفل قلمي مزرعه اي و گلخانه‌اي استان تهران جمع آوري شد. با استفاده از آزمون هاي‌ سرولوژيكي Double ،Antibody Sandwich Elisa (DAS-ELISA) وDot immunobinding assay (DBIA) حضور ويروس در 22% نمونه ها تاييد شد. خصوصيات بيولوژيكي جدايه هاي ويروس با مايه زني مكانيكي گياهان محك و ويژگي هاي مورفولوژيك آن ها با مشاهده پيكره هاي ايزومتريك با روش Immunosorbent electron microscopy (ISEM) مورد بررسي قرار گرفت. آلودگي نمونه هاي گياهي به ToRSV با استفاده از آزمون reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) و كاربرد آغازگر اختصاصي طراحي شده در اين تحقيق جهت تكثير قسمتي از ژن توليد كننده پليمراز ويروس مورد تاييد قرار گرفت. قطعه ژني تكثير شده مربوط به يكي از جدايه ها در پلاسميد pTZ57R/T وارد و به سويه DH5? باكتري E. coli انتقال داده شد و همسانه سازي قسمتي از ژن پليمراز ويروس انجام پذيرفت. پلاسميد همسانه سازي شده استخراج و سپس ترادف قطعه ژنتيكي مربوط تعيين گرديد و با كد دسترسي JQ972695 در NCBI ثبت گرديد. مقايسه با استفاده از ابزار جستجوي Blast ميزان 94-87 % شباهت بر مبني توالي نوكليوتيدي و 98-94% شباهت بر مبني توالي اسيد آمينه اي بين نژادهاي ايراني و آمريكايي مشخص شد. داده هاي اين بررسي مي تواند جهت رديابي، بررسي پراكنش و دامنه ميزباني و استفاده در روش هاي مديريت مبارزه با ويروس در مزارع فلفل ايران به كار رود.

Tomato ring spot virus (ToRSV) is one of the most important viruses threatening vegetable production worldwide. During the years 2010 to 2012, a total of 110 asymptomatic and symptomatic pepper leaf samples with viral affecting like symptoms were randomly collected from fields and greenhouses of Tehran province. Plant samples were tested for the presence of ToRSV using Double Antibody Sandwich Elisa (DAS-ELISA) and Dot immunobinding assay (DBIA). Results indicated that 22% of the samples were infected with ToRSV. Bioassay was performed with the mechanical inoculation of herbaceous indicator plants to evaluate the biological properties of the detected isolates. The morphological features of the virus isolates were studied using Immunosorbent electron microscopy (ISEM). Specific pair of primers designed on the basis of a portion of the RdRP gene sequence and the presence of the ToRSV was confirmed with the reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) for serologically detected samples. An PCR amplicon of a sequence related to the RdRP gene from a representative isolate, was selected and cloned into the pTZ57R/T plasmid vector. Recombinant plasmid contained ToRSV-RdRP gene was transformed into Escherichia coli DH5?. Recombinanat plasmid was isolated and the inserted DNA fragment was sequenced and submitted to NCBI with accession number (JQ972695). At the deduced amino acid and nucleotide sequence levels of the RdRP gene, Iranian ToRSV isolate showed 94-98% and 87-94% identity to corresponded American isolates respectively. Results of this study could be useful for ToRSV detection, host range determination, distribution condition and designing of control management strategies against ToRSV in pepper fields of Iran.