استخراج آنزيم ليپاز توليدي توسط قارچ Aspergillus niger از براث تخميري با استفاده از سيستم دو فازي آبي

Purification of a desired protein from fermentation broth containing a wide variety of biomolecules is one of the major challenges in the biotechnology industry. The aim of this work was partitioning

يكي از چالش‌هاي عمده در صنعت بيوتكنولوژي، تخليص پروتيين و آنزيم‌هاي مطلوب از مجموعه بيومولكولهاي موجود در سوسپانسيون تخميري است. هدف از اين تحقيق جداسازي ليپاز با استفاده از سيستم‌هاي دوفازي آبي مي‌باشد. سيستم دوفازي آبي روشي ارزشمند براي جداسازي و تخليص مخلوط‌هايي از بيومولكول ها است. در اين تحقيق سيستم‌هاي دوفازي آبي مختلف شامل پلي اتيلن گلايكول با وزن مولكولي 4000 و 8000 و نمك‌هاي اگزالات پتاسيم و تارتارات سديم - پتاسيم براي استخراج ليپاز از سوسپانسيون تخميري مورد آزمايش قرار گرفتند. پس از بررسي پارامترهاي تاثيرگذار بر سيستم، بهترين شرايط عملياتي براي استخراج ليپاز شامل 5/17 درصد وزني پلي اتيلن گلايكول 4000 و 5/19 درصد وزني اگزالات پتاسيم و 2/10 درصد وزني به وزني سوسپانسيون تخميري در 5=pH تعيين گرديد. در اين شرايط ضريب جداسازي 29/1، درصد بازيابي آنزيم 93/84 ، فاكتور تخليص 59/17و فعاليت ويژه آنزيمي 22/22 بدست آمد.

Purification of a desired protein from fermentation broth containing a wide variety of biomolecules is one of the major challenges in the biotechnology industry. The aim of this work was partitioning of lipase using aqueous two phase systems (ATPS). ATPS has proved to be a valuable tool for separating and purifying mixtures of biomolecules. In this study, the various aqueous two phase systems containing poly ethylene glycol 4000, 8000 and potassium oxalate and sodium-potassium tartrate were examined for extraction of lipase from fermentation broth. The results show that, the best operating system was contained the 17.5%(w/w) PEG4000,19.5%(w/w) potassium oxalate , 10.2%(w/w) crude fermentation broth loading and pH=5, resulted in partition coefficient (Ke) of 1.29 ,enzyme activity recovery of 84.93% , purification factor of 17.59 and specific activity of 22.22.