بررسي بيان miR-21 و miR-221 در سرطان معده و ارتباط آن با ژنهاي RECK وCDKN1B

Evaluation of miR-21 and miRNA-221 in gastric tumor and their correlation with RECK and CDKN1B expression

چكيده سابقه و هدف: مطالعات اخير بيانگر نقش كليدي miR-221 و miR-21 در سرطان معده مي باشند . هر چند دانش ما در مورد مكانيسم مولكولي عملكرد miR-221 و miR- 21 در سرطان بطور كلي و در سرطان معده بطور خاص محدود است. در اين مطالعه دو microRNA بالقوه انكوژن (miR-221 و miR-21) انتخاب شده تا ارتباط سطوح بيان اين microRNA ها و ژن هاي هدف آنها در بافت سالم و سرطاني معده مقايسه شوند. هدف اين مطالعه بررسي ارتباط بيان اين دو microRNA و ژن هاي هدف آنها در جمعيت ايراني بود. روش بررسي: اين مطالعه يك مطالعه موردي – شاهدي بود كه بر روي تعداد 32 نمونه از بافت سرطاني معده و بافت مجاور آن انجام شد. نمونه ها از بيماران مراجعه كننده به انستيتو كانسر بيمارستان امام خميني (ره) در فاصله سال هاي 1388 تا 1391 جمع آوري گرديد. RNA تام با استفاده از محلول ترايزول و بر اساس دستورالعمل شر كت استخراج شد. cDNA براي mRNAو microRNA ساخته شد و سطوح بيان اين ژن ها با qr-TPCR اندازه گيري شد. 18s rRNA و 5s rRNAبه عنوان كنترل داخلي استفاده شد. براي تحليل ميزان بيان ژن ها در نمونه هاي توموري نسبت به نمونه هاي سالم از آزمون paired t-test استفاده گرديد و براي تعيين ارتباط بين سطح بيان miR-21 و miR-221، آزمون ضريب همبستگي پيرسون (Pearson) بكار گرفته شد. يافته ها: در ميزان بيان miR-221 و miR-21 به صورت معني داري در بافت سرطاني درمقايسه با بافت سالم مجاورش افزايش مشاهده شد. در نمونه سرطاني ميانگين بيان miR-21 برابر با 07/1± 18/4) 001/0(P < و ميانگين بيان miR-221 برابر با 07/2 ± 75/5 بود ) 001/0(P < نتايج نشان داد كه ارتباط معني داري بين افزايش بيان 21- miRو كاهش بيان RECK (01/0 p= و 42/0- r=) و همچنين افزايش بيان 221- miRو كاهش بيان CDKN1B وجود دارد (008/0 p= و 46/0- r=) . نتيجه گيري: اين مطالعه نشان داد كه بيان 221 miR- و 21 - miR در بافت سرطاني معده افزايش مي يابد و بين افزايش 21-miR و كاهش بيان RECK و همچنين افزايش بيان 221- miR و كاهش بيان CDKN1B رابطه معني دار وجود دارد. احتمالا اين دو microRNA مي توانند به عنوان بيو ماركر در سرطان معده استفاده شوند. كلمات كليدي:miR-21 ،miR-221 ،Realtime PCR ،SYBERGreen، سرطان معده

ABSTRACT Background and Aim: Recent studies on expression patterns of miR-21 and miR- 221 genes in gastric cancer suggest their key role in tumorigenesis. However, their molecular mechanism in cancer and especially gastric cancer has not been well understood. In this study, we aimed to investigate the association of these two micro RNAs expression and their target genes in normal and gastric carcinoma tissues. Methods: Thirty two gastric cancer tissues and its adjacent non-tumorous tissues were collected from patients referred to the cancer institute of Imam Khomeini hospital during 2008-2011. Total RNA was isolated and then cDNAs for microRNAs and mRNA were synthesized. The expression levels of miR-21 and miR-221 were detected by quantitative Real time RT- PCR using a 5s rRNA and 18s rRNA as the internal reference genes. Results: miR-21 and miR-221 expression were significantly up-regulated in cancerous samples compared to its adjacent non-tumorous tissue. The mean expression of miR-21 in the tumor sample was 4.18± 1.07 (P < 0.001) and the mean expression of miR-221 was 5.75± 2.07 (P < 0.001). The expression levels of miR-21 and miR-221 were negatively correlated with the expression levels of RECK and CDKN1B/p27 respectively. Conclusion: This study showed the expression of miR-21 and miR-221 increased in gastric cancer. There was a significant inverse correlation between increased expression of miR-21 and decreased expression of RECK, as well as between increased expression of miR-221 and decreased expression of CDKN1B. As a result, mi R-21 and miR-221 can be suggested two biomarkers in gastric cancer. Keyword: miR-21, miR-221, Real time RT-PCR, SYBR Green.