تاثير آفلاتوكسينB1 بر بيان ژن‌هايBRCA1 وBRCA2 در شرايط كشت آزمايشگاهي رده سلولي نرمال اپيتليال پستان نوع انساني (HMEC)

Effect of aflatoxin B1 on BRCA1 and BRCA2 genes expression under in vitro cultured cell line of normal Human Mammary Epithelial Cells (HMEC)

مقدمه: آفلاتوكسين‌ها تركيباتي سرطان‌زا هستند كه توسط قارچ‌هاي Aspergillus flvaus و A. parasiticus توليد مي‌شوند. در ميان آفلاتوكسين‌هاي شناخته‌شده سرطان‌زايي آفلاتوكسين B1 بيشتر از ساير آفلاتوكسين‌ها مي‌باشد. اين سم مي‌تواند با آلوده كردن مواد غذايي وارد بدن انسان و درنهايت بافت پستان شود. دو ژن موثر در سركوب تومور در پستان، ژن‌هاي BRCA1 و BRCA2 مي‌باشند كه بيان اين ژن‌ها مي‌تواند توسط آفلاتوكسين B1 تحت تاثير قرار گيرد. مواد و روش‌ها: به‌منظور بررسي تاثير آفلاتوكسين B1 بر بيان ژن‌هاي BRCA1 و BRCA2، رده سلولي نرمال اپيتليال پستان نوع انساني (HMEC) به‌صورت تك لايه كشت داده شد. 10 روز پس از كشت تك لايه و رسيدن به تعداد سلول مناسب، سلول‌ها به‌منظور اعمال تيمارها به 16 فلاسك 2cm 25 (چهار تيمار هركدام چهار تكرار) پاساژ داده شد. بعد از رشد سلول‌ها، سه تيمار 15، 25 و 35 ميكروليتري آفلاتوكسين B1 به فلاسك‌ها اضافه گرديد. 24 ساعت پس از اعمال تيمارها سلول‌ها به‌منظور استخراج RNA، تبديل به cDNA و انجام Real time PCR از فلاسك‌ها جدا شدند. به‌منظور بررسي قدرت زنده‌ماني سلول‌ها MTT تست صورت گرفت. يافته‌ها: نتايج اين مطالعه نشان داد هر سه غلظت 15، 25 و 35 ميكروليتري سم سبب كاهش بيان ژن‌هاي BRCA1 و BRCA2 مي‌شود (0/0001 < P). همچنين نتايج MTT تست نيز نشان داد قدرت زندماني سلول‌ها با افزايش غلظت سم و مدت‌زمان تماس با سم كاهش مي‌يابد. نتيجه‌گيري: با توجه به نتايج حاصله به نظر مي‌رسد آفلاتوكسين B1 با كاهش بيان ژن‌هاي BRCA1 و BRCA2 مي‌تواند خطر ابتلا به سرطان پستان را افزايش دهد.

Background: Aflatoxins are carcinogenic compounds that are produced by Aspergillus flvaus and A. parasiticus fungi growing on foods. Among variety of known aflatoxins, aflatoxin B1 has been reported as the most carcinogenic compounds. This toxin can enter human body through contaminated food. The mammary tissue is one of the body tissues that aflatoxin B1 can penetrate. The BRCA1 and BRCA2 genes are two major effective genes mammary gland tumor suppression, so expression of these genes can be affected by aflatoxin B1. Materials and Methods: In order to evaluate the effects of aflatoxin B1 on BRCA1 and BRCA2 genes expression, normal Human Mammary Epithelial Cells (HMEC) were cultured as monolayer. After 10 days, monolayer cells culture reached suitable amount and was passaged for treatment to 16 flasks 25cm2 (four treatments with four replicates for each one). After proper cells growth, three treatments, 15, 25 and 35 µl of aflatoxin B1 were added to the flasks and then, cells were separated for extraction of RNA, cDNA and Real time PCR performance after 24 hours. MTT assay was performed to measure cell viability. Results: The results showed that all three concentrations decreased the expression of BRCA1 and BRCA2 genes (P < 0.0001). In addition, the results of MTT assay showed that cell viability was reduced with increasing concentration of toxin and duration of exposure. Conclusion: According to the results, it seems that aflatoxin B1 can increase the risk of breast cancer by reducing expression of BRCA1 and BRCA2 genes.