مقايسه سه روش استخراج RNA از پوست ميوه انار

COMPARISON OF THREE GENOMIC RNA EXTRACTION METHODS FROM POMEGRANATE PEEL

سابقه و هدف: استخراج RNA‌ي با كميت و كيفيت مطلوب از نياز هاي بنيادي زيست شناسي مولكولي است. جداسازي RNA از بافت ‌هاي گياهان چوبي به علت حضور مقادير زيادي از كربوهيدارات ها، تانن ها و تركيبات پلي فنولي با مشكلاتي روبروست. بنابراين دستيابي به يك روش استخراج مناسب كه بتواند RNA‌ي كيفي مطلوبي را توليد كند، از اهميت بالايي برخوردار است. مواد و روش ها: در اين تحقيق سه روش استخراج RNA شامل: 1- زارعي و همكاران، 2-IHBT و 3- روش تغيير يافته CTAB-LiCl مورد بررسي و از پوست ميوه هاي رسيده به عنوان مواد گياهي براي استخراج RNA استفاده گرديد. يافته ها در نهايت با توجه به كميت و كيفيت RNA استخراجي و نتايج حاصل، روش زارعي و همكاران به منظور استخراج RNA با خلوص بالا از پوست انار انتخاب شد. بيشترين مقدار RNAبا كيفيت مطلوب از 100 ميلي گرم بافت پوست ميوه به مقدار 642 نانوگرم با روش زارعي و همكاران بدست آمد. نتيجه گيري: از ميان روش هاي مورد آزمايش، روش زارعي و همكاران مناسب ترين روش براي گياهان با تركيبات فنولي بالا به ويژه انار مي باشد. از اين رو نيازي به استفاده از كيت هاي استخراج و مواد شيميايي خطرناك احساس نمي شود.

Aims and Background: RNA extraction with high quantity and quality is a fundamental requirement for molecular biology studies. Presence of carbohydrate, tannins, proteins and polyphenols compounds have created problem for extracted RNA from woody plant. Therefore, it is important to a suitable extraction method to produce a good quality RNA. Materials and Methods: Methods for RNA extraction were compared to choose the best method of RNA extraction from pomegranate (Punica granatum L.) peel. These methods included 1-Zarei et al 2- IHTB 3-CTAB–LiCl modified method. Results: Of the methods tested, Zarei et al method is the most appropriate method for plants with high phenolic compounds, especially pomegranate. Hence the need for the use of dangerous chemical material and extraction kits is not felt. Conclusion: At the end of experiment with attention to results and comparison between methods, Zarei et al method was selected as the best method for RNA extraction from fruit peel with high quantity, quality and purity. Maximum amount of RNA with high quality that extracted from Zarei et al method was 642 ng per 100 mg peel tissue.