بررسي رابطه الگوي ژنتيكي و حساسيت به داروي فلوكونازول در ايزوله‏‏هاي كلينيكي ترايكوفايتون روبروم

Study of Relationship between Genetic Pattern and Susceptibility to Fluconazole in Clinical Isolated of Trichophyton rubrum

زمينه و هدف: ترايكوفايتون روبروم معمول‏ترين پاتوژن مولد بيماري درماتوفيتوزيس است. فلوكونازول دارويي از خانواده آزول‏‏ها است كه جهت درمان تجويز مي‏شود. اخيراً روش‏‏هاي تايپينگ مولكولي براي پاسخ دادن به سوالات اپيدميولوژيكي و مشكلات عود مجدد بيماري گسترش زيادي يافته اند. اين مطالعه روي 22 ايزوله ترايكوفايتون روبروم كه به طور اتفاقي از بيماران مبتلا جدا شده بود، انجام گرفت. هدف مطالعه بررسي رابطه الگوي ژنتيكي و حساسيت به داروي فلوكونازول در ايزوله‏‏هاي كلينيكي ترايكوفايتون روبروم بود. روش كار: ابتدا جنس و گونه قارچ‏‏هاي جداشده از بيماران با روش‏‏هاي ماكروسكوپي و ميكروسكوپي تاييد گرديد. سپس با استفاده از محيط كشت‏‏هاي حاوي مقدار معين دارو مقاومت و حساسيت ايزوله‏‏ها نسبت به دارو تعيين شد. در مرحله بعد DNA قارچ‏‏ها استخراج گرديد و RAPD-PCR (تكثير تصادفي قطعات پلي مرفيك) با استفاده از 3 پرايمر با توالي تصادفي انجام گرفت. يافته‏ها: هر پرايمر الگوي تكثيريافته متفاوتي را ايجاد كرد و با هر 3 پرايمر تفاوت‏‏هايي در الگوي ژنتيكي نمونه‏‏هاي حساس و مقاوم ديده شد ولي هيچ باندي كه 100% اختصاصيت را نشان دهد، يافت نشد. نتيجه گيري: 12 ايزوله حساس كه در غلظت 50 ميكروگرم در ميلي ليتر دارو رشد نكردند، در غلظت‏‏هاي پايين‏تر دارو نيز رشد آن‏‏ها به ميزان چشمگيري در مقايسه با پليت شاهد محدود شد. 10 ايزوله مقاوم كه در غلظت 50 ميكروگرم در ميلي ليتر دارو رشد كردند، در غلظت‏‏هاي پايين‏تر دارو نيز از خود مقاومت نشان دادند. تفاوت‏‏هايي در الگوي ژنتيكي نمونه‏‏هاي حساس و مقاوم وجود دارد. آناليز RAPD جهت تايپينگ مولكولي ايزوله‏‏هاي ترايكوفايتون روبروم كاملاً مناسب نشان داد.

Background & objectives: Trichophyton rubrum is one of the most common pathogenic causes of dermatophytosis. One of the drugs prescribed for fungal infections is fluconazole which belongs to Azoles group of antifungal agents. Recently molecular typing methods have been developed for answering the epidemiological questions and disease recurrence problems. Current study has been conducted on 22 isolates of Trichophyton rubrum obtained from patients randomly. Our aim was the investigation of correlation between genetic pattern and sensitivity to Fluconazole in clinical isolates of Trichophyton rubrum. Methods: Firstly the genus and species of isolated fungi from patients have been confirmed by macroscopic and microscopic methods. Then, the resistance and sensitivity of isolates against drug have been determined using culture medium containing defined amount of drug. In next step fungal DNA has been extracted by RAPD-PCR (random amplified polymorphic DNA) with random sequences of 3 primers. Results: Each primer produced different amplified pattern, and differences have been observed in genetic pattern of resistant and sensitive samples using each 3 primers, but there was no bond with 100% specificity. Conclusion: The 12 sensitive isolates which didn’t grow in 50µg/ml concentration of drug, also had limited growth at the lower concentration of drug. Ten resistant isolates which grew in 50µg/ml of drug, also showed resistant to lower concentration of drug. There are differences in genetic pattern of resistant and sensitive samples. RAPD analysis for molecular typing of Trichophyton rubrum seems to be completely suitable. Keywords: Trichophyton rubrum, Fluconazole, RAPD-PCR, Genetic Diversity.