بيان ژنVEGF و MMp9 در اثر تيمار با پروتيين نوتركيب فعال كننده نوتروفيلي هليكوباكترپيلوري بر مدل سرطان پستان

VEGF and MMP-9 Gene Expression Caused by Treatment with Helicobacter Pylori Neutrophil-activating Recombinant Protein in a Breast Cancer Model

سابقه و هدف: سرطان پستان از علل عمده مرگ و مير زنان در سراسر جهان است. درمان هاي دارويي سيتوتوكسيك داراي سطح بالايي از عوارض جانبي براي بيمار مي باشد. پروتيين نوتركيب فعال كننده نوتروفيلي هليكوباكترپيلوري (HP-NapA)، يكي از مهمترين پروتيينهاي ترشحي هليكوباكترپيلوري است. هدف از اين مطالعه بررسي بيان ژن VEGF و MMp9 در اثر تيمار با پروتيين نوتركيب فعال كننده نوتروفيلي هليكوباكترپيلوري بر مدل متاستاتيك سرطان سينه است. مواد و روشها: در اين مطالعه تجربي، از 18 سر موش ماده نژاد Balb/c 8-6 هفته اي با وزن 23-19 گرم استفاده شد. موش هاي توموري تهيه و در 3 گروه تست و كنترل (درمان با پروتيين نوتركيب، كنترل مثبت كه داروي ضدسرطاني ترانستوزمپ دريافت كردند و گروه كنترل منفي PBS) تقسيم شدند. بيان و تخليص پروتيين نوتركيب HP-NapA با استفاده از روش كروماتوگرافي ميل تركيبي با رزين نيكل (Qiagen) انجام شد. موش هاي توموري سرطان سينه با HP-NapA تيمار شدند. بيان ژن هاي MMP-9 و VEGF با روش real time PCR مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته‌ها: بيان پروتيين با روش SDS-PAGE تاييد شد. اندازه پروتيين بيان شده 20000 دالتون بود. نتايج نشان داد كه پروتيين HP-NapA موجب كاهش بيان ژنهاي MMP-9 و VEGF در مقايسه با گروه كنترل منفي مي گردد. اين كاهش ميزان بيان، حدود يك چهارم بيان ژن هاي گروه كنترل بود (P < 0.01). نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد كه HP-NapA اثر كاهشي بر بيان ژن هاي دخيل در متاستاز بر مدل موش هاي توموري سرطان سينه در مطالعات حيواني دارد. اين پروتيين ممكن است به عنوان يك ابزار جديد براي راهكارهاي درماني در آينده براي درمان سرطان مطرح باشد.

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Breast cancer is a major cause of death in women, worldwide. Cytotoxic drugs may lead to various adverse side-effects in patients. Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is one of the most important proteins, produced by helicobacter pylori. The purpose of this study was to investigate the expression of VEGF and MMP-9 genes, caused by HP-NAP treatment in a breast cancer model. METHODS: In this experimental study, 18 female BALB/c mice, aged 6-8 weeks (19-23 g), were used. The mice were allocated to three groups: test group (treated with recombinant HP-NAP), positive control group (treated with an anti-cancer drug called trastuzumab), and negative control group (receiving phosphate-buffered saline). Expression and purification of HP-NAP were performed using nickel-resin affinity chromatography (Qiagen). The mice with breast tumors were treated with HP-NAP. MMP-9 and VEGF gene expression was measured using real-time polymerase chain reaction (PCR). FINDINGS: Protein expression was confirmed, using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The analysis showed the expression of a 20,000 dalton protein. Moreover, MMP-9 and VEGF gene expression decreased more significantly in the test group (due to treatment with HP-NAP), compared to the negative control group. The reduced expression in the test group was almost a quarter of the expression in the control group (p < 0.01). CONCLUSION: The results showed that HP-NAP can reduce the expression of genes involved in metastasis in a mouse model of breast cancer. Therefore, this protein can be exploited for future therapeutic strategies in cancer treatment. KEY WORDS: Neutrophil-Activating Factor, Breast Cancer, Metastasis, Immunotherapy.