شناسايي مولكولي كريپتوسپوريديوم آندرسوني در گوساله‌هاي شهرستان شهريار

Molecular identification of Cryptosporidium andersoni in Shahriar calves

تك یاخته كریپتوسپوریدیوم آندرسونی از كوكسیدیاهای بیماری‌زا در گاو و گوسفند است. در مطالعه حاضر 940 نمونه مدفوع گوساله‌های 2 ماهه تا یك ساله شهرستان شهریار به روش ذیل نلسون اصلاح شده رنگ‌آمیزی شدند. سپس جهت مطالعه مولكولی DNA انگل استخراج گردید و قطعه 845 جفت بازی ژن 18S rRNA كریپتوسپوریدیوم در نمونه‌های مثبت با روش Nested PCR تكثیر گردید و محصول توسط دو آنزیم Ssp1 و Vsp1برش داده شد. قطعه تكثیرشده تعیین توالی نیز گردید. طبق نتایج حاصله، 23 نمونه (44/2%) در روش رنگ‌آمیزی از نظر آلودگی به كریپتوسپوریدیوم مثبت بودند. تمامی نمونه‌های مثبت با روش Nested PCR تكثیر یافتند. نمونه تكثیر یافته دارای حركت الكتروفورتیك مشابه بر روی ژل آگاروز و دارای الگوی مشابه با كریپتوسپوریدیوم آندرسونی بودند. نتایج حاصل با مقایسه ترادف بازی قطعه ژن نمونه مذكور با داده‌های ثبت شده در بانك ژن مورد تایید قرار گرفت.

Cryptosporidium andersoni is a pathogenic coccidia of cattle and sheep. In the present study, 940 fecal samples were investigated from calves aged from 2 months to 1 year old of Shahriar city. The smears of the samples were stained with modified Ziehl Neelsen technique. For molecular study, DNA was extracted by phenol-chloroform from stool positive samples, then 18s rRNA gene of Cryptosporidium was amplified by Nested PCR method. The resulted band was cut with two restriction enzymes (Vsp1 and Ssp1). Finally the resulting amplicon of Nested PCR was sequenced.The results indicated that, 23 cases were diagnosed to be positive with staining technique. All PCR-RFLP patterns of 18S rRNA gene of calve samples showed similar electrophoretic mobility on agarose gel and identified as Cryptosporidium andersoni. The result was also confirmed by sequencing analysis.