الگوي بيان چرخه‌هاي سيگنالي LIF و 2- FGF در سلول‌هاي بنيادي روياني حاصل از لقاح آزمايشگاهي، همتاسازي و خودگشني در گاوميش

Transcriptional profiling of LIF and FGF-2 signaling pathways in buffalo embryonic stem cells derived from in vitro fertilized, parthenogenetic and handmade cloned embryos

سلول های بنیادی رویانی كه از لایه زاینده داخلی رویان در مرحله بلاستوسیست تولید می شوند، توانایی تمایز به  انواع سلول های لایه زاینده رویان شامل برون پوست ، میان پوست و درون پوست را دارند. اطلاعات كمی در ارتباط با فاكتورهایی كه بر تمایز یا حفظ سلول در حالت تمایز نیافته اثر می گذارند وجود دارد. در این مطالعه الگوی بیان چرخه های فاكتور مهاركننده لوكمیا (LIF) و فاكتور رشد فیبروبلاستی (2-FGF)، به منظور درك بهتر ارتباط چرخه های سیگنالی در خودنوسازی سلول های بنیادی رویانی گاومیش مورد بررسی قرار گرفت. سلول های بنیادی رویانی از رویان های حاصل از لقاح آزمایشگاهی (IVF)، همتاسازی  (IVC) و خودگشنی (Parthenogenesis) بدست آمدند و از آلكالین فسفاتاز و رنگ آمیزی ایمیونو فلورسانس به منظور شناسایی سلول های بنیادی استفاده شد. به منظور كشت سلول های بنیادی از لایه تغدیه كننده استفاده شد و محیط كشت حاوی Ko-DMEM،KSR ، LIF، 2-FGF، ال- گلوتامین، اسیدهای آمینه غیر ضروری و جنتامایسین بود. بیان ژن های حد واسط چرخه های LIF و 2-FGF با استفاده از RT-PCR بدست آمد. نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد، بیان2-FGF در سلول های بنیادی رویانی گاومیش بیشتر از LIF بود. 2-LIF ، FGF، گیرنده های آن ها و تركیبات حد واسط این چرخه ها در سلول های بنیادی رویانی حاصل از هر سه منشاء تقریبا در حد یكسانی بیان شدند.

Embryonic stem cells (ESCs) are derived from the inner cell mass (ICM) of blastocyst and differentiate into all three embryonic germ layers: ectoderm, endoderm, and mesoderm. There is less information available about the factors that are affecting buffalo ES cells in culture. In this study, expression profiles of the Leukemia Inhibitory Factor (LIF) and basic Fibroblast Growth Factor (FGF-2) signaling pathways were investigated to better understand the relationships of the signaling pathways for self-renewal in buffalo ES cells. Buffalo ES cells were derived from in vitro fertilized (iESC), parthenogenetic (pESC) and handmade cloned (cESC) embryos. Alkaline phosphatase and immune-fluorescence staining were used to characterize buffalo ES cells. Feeder layer was used for ESCs culture, and culture medium consisting of Knockout- Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (Ko-DMEM) supplemented with Knockout Serum Replacement (KSR), leukemia inhibitory factor (LIF), basic fibroblast growth factor-2 (FGF-2), L-glutamine, nonessential amino acids and gentamicin. Gene expression was analysed by RT-PCR for signaling pathways. Results showed that, the expression of FGF-2 was higher than LIF in buffalo ESCs. LIF, FGF, their receptors and intermediate signaling pathways was expressed at almost same level in three sources of buffalo ESCs.