تشخيص ژنوم روتاويروس با روش جديد رنگ آميزي نيترات نقره

زمينه و هدف : روتاويروس ها عضو خانواده رئوويرويده و داراي ژنوم RNA دو رشته اي بوده و مهم ترين عامل گاستروانتريت در نوزادان و كودكان زير سه سال است. اين مطالعه به منظور ارزيابي تشخيص ژنوم روتاويروس با دو روش رنگ آميزي تغيير شكل يافته نيترات نقره با استفاده از الكتروفورز ژل پلي آكريل آميد در مقايسه با رنگ آميزي مرسوم نيترات نقره انجام شد. روش بررسي : در اين مطالعه توصيفي روتاويروس از 6 نمونه استاندارد كشت سلولي MA-104 آلوده با دو ويروس RV4 انساني و RF گاوي به صورت مجزا استخراج شد. RNA روتاويروس از نمونه ها استخراج و براي تشخيص حضور ژنوم روتاويروس، الكتروفورز در ژل پلي آكريل آميد 10درصد انجام گرديد. با استفاده از رنگ آميزي نيترات نقره باندهاي RNA شناسايي شدند. يافته ها : پس از كشت سلول و تكثير ويروس، آثار تخريب سلولي به صورت كنده شدن سلول ها از بستر مشاهده شد كه نشان دهنده تكثير ويروس در سلول ها بود. حركت الكتروفورتيك dsRNA روتاويروس سويه RF استاندارد براساس افزايش وزن مولكولي و حركت در ژل پلي آكريل آميد از شماره 11-1 جداسازي شد و به صورت چهار قطعه سنگين، سه قطعه سه تايي، دو قطعه متوسط و دو قطعه كوچك با الگوي ژنومي گروه A روتاويروس تاييد شد. رنگ آميزي نقره و برآورد حساسيت روش با رقت هاي دوبرابري ژل ماركر مشاهده شد. كمترين رقت قابل اندازه گيري توسط اين روش هفت پيكوگرم بود. همچنين با اين روش در كمتر از 10 دقيقه رنگ آميزي به طور مطلوب صورت گرفت. نتيجه گيري : روش جديد رنگ آميزي نقره قابليت تشخيص الگوي ژنومي ويروس ها در مدت زمان كمتر و براي نمونه هاي در حد هفت پيكوگرم را داراست.