اثر ميكروپارتيكل‌هاي پلاكتي بر ميزان بيان شاخص CXCR4 در سلول‌هاي CD133+ جدا شده از خون بند ناف

Evaluation of platelet microparticles effect on the expression of CXCR4 in umbilical cord blood derived CD133+ cells

چكيده سابقه و هدف سلول‌هاي CD133+ خون بند ناف قادرند براي مدت طولاني، خونسازي را برقرار كرده به رده‌هاي هماتوپويتيك و غيره تمايز يابند. افزايش بيان شاخص CXCR4 در لانه گزيني موفق سلول‌هاي بنيادي خونساز به مغز استخوان، نقش دارد. ميكروپارتيكل‌هاي پلاكتي حاوي شاخص CXCR4 بوده و قادرند آن را بهHSPCها منتقل كنند. با توجه به موارد فوق، تاثير ميكروپارتيكل‌هاي پلاكتي بر ميزان بيان شاخص لانه گزيني CXCR4 در سلول‌هاي CD133+ بررسي شد. مواد و روش‌ها در اين مطالعه تجربي، سلول‌هاي CD133+ خون بند ناف به روش MACS جداسازي شدند. سپس يك گروه از اين سلول‌ها به عنوان گروه كنترل كشت شدند و دو گروه ديگر با غلظت‌هاي پروتييني µg/mL 5 و µg/mL 10 ميكروپارتيكل‌هاي پلاكتي تهيه شده به روش ذوب- فريز- سونيكاسيون‏، مجاور شدند. اين سلول‌ها به مدت پنج روز در محيط ”Stem SpanTM” كشت شدند و ميزان چند برابر شدن سلول‌ها‏، كلني‌زايي آن‌ها‏ و بيان سطحي شاخص CXCR4 و CD34 توسط تجزيه و تحليل فلوسيتومتري بررسي گرديد. يافته‌ها ميزان چند برابر شدن سلول‌هاي CD34+و CXCR4+در سلول‌هاي كنترل و در حضور غلظت‌هاي µg/mL 5 و µg/mL 10 ميكروپارتيكل‌هاي پلاكتي به ترتيب 16/4 ± 6/52 ، 91/6 ± 2/64 و 76/6 ± 2/67 بود (047/0p=). هم چنين ميزان بيان شاخص سطحي CXCR4 در سلول‌هاي مجاور شده با غلظت پروتييني µg/mL 10 ميكروپارتيكل‌هاي پلاكتي روز پنجم در مقايسه با سلول‌هاي كنترل(4/6 ± 8/63)، 4 ± 8/72 و تفاوت معناداري داشت(049/0p=). نتيجه گيري مجاورت سلول‌هاي CD133+ جدا شده از خون بند ناف با غلظت پروتييني µg/mL10 ميكروپارتيكل‌هاي پلاكتي، باعث افزايش معنادار بيان ماركر CXCR4 گرديد.

Abstract Background and Objectives Cord blood CD133+ cells are able to maintain long-term hematopoiesis and to differentiate to different hematopoietic lineages. CXCR4 overexpression is involved in successful transplantation of hematopoietic stem cells in the bone marrow. Platelet micro particles (PMP) contain CXCR4 markers and are able to transfer them into hematopoietic stem cells. Therefore, considering the importance of CD133+ cells as primitive HSCs, the effect of platelet micro particles on the expression levels of CXCR4 and CD34 markers in these cells was examined. Materials and Methods In this experimental study, cord blood CD133+ cells were isolated by MACS. Isolated cells were cultured into three groups one as control without adding PMP and the other two groups with PMP with concentrations of 5 and 10 ?g/mL. The cells were cultured for five days in stem span medium. Expression of CXCR4 surface marker was analyzed by flow cytometery; the total cell number was counted by hemocytometer and colony forming units (CFU) were measured by colony assay. Results Fold increase of CD34+ and CXCR4+ cells in the control group and in the presence of 5 and 10 µg/mL of PMP were 52.6 ± 4.16, 64.2 ± 6.91, and 67.2 ± 6.76, respectively (p= 0.047). CXCR4+ cell percentage in the presence of 10 µg/mL PMP compared to control cells (63.8 ± 6.4) was 72.8 ± 4 (p= 0.049). Conclusions Exposure of CD133+ cells isolated from cord blood to PMP with 10 ?g/mL concentration increased the expression of CXCR4 surface marker significantly.