توليد پروتياز قليايي توسط باسيلوس تيكيولنسس سويه FJSH2 جدا شده از فاضلاب كشتارگاه دام جيرفت

The production of alkaline protease by Bacillus tequilensis FJSH2 isolated from Jiroft’s slaughterhouse wastes

سابقه و هدف: پروتيازها پرمصرف ترين آنزيم هاي صنعتي هستند كه كاربردهاي زيادي در زيست فناوري دارند. به طوري كه حدود 60 درصد از بازار جهاني آنزيم هاي صنعتي را به خود اختصاص داده اند. پروتيازهاي قليايي به دليل مقاوم بودن در pH قليايي و حضور عوامل سورفاكتانت يا اكسيدكننده بسيار مهم مي باشند. اين مطالعه با هدف جداسازي و شناسايي سويه مولد پروتياز از فاضلاب كشتارگاه دام جيرفت انجام شد. مواد و روش ها: اين مطالعه به صورت مقطعي بر روي نمونه هاي فاضلاب كشتارگاه دام شهرستان جيرفت انجام شد. سويه مولد پروتياز در محيط اسكيم ميلك آگار غربالگري گرديد. ژن S rRNA16 با روش PCR تكثير و سپس تعيين توالي گرديد. پروتياز با روش رسوب دهي با سولفات آمونيوم و كروماتوگرافي تعويض يوني به طور نسبي خالص سازي شد. در ادامه ويژگي هاي بيوشيميايي پروتياز تخليص شده مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: نتايج تعيين توالي نشان داد كه سويه جداسازي شده با قرابت 100 درصدي به باسيلوس تيكيولنسس تعلق دارد. پروتياز تخليص شده حداكثر فعاليت و پايداري را در pH معادل 9 و درجه حرارت 40 درجه سيليسيوس نشان داد. مقادير Km و Vmax بر اساس معادله لاين ويربرگ به ترتيب mg/ml 6/77 و U/ml/min 64/94 به دست آمد. پايداري پروتياز در حضور حلال هاي آلي سيكلوهگزان و DMSO به ميزان 1/8 و 2/4 برابر با افزايش همراه بود. نتيجه گيري :فعاليت و پايداري قابل توجه پروتياز در شرايط قليايي و در حضور حلال هاي آلي نشان دهنده پتانسيل قابل توجه اين آنزيم براي استفاده در صنعت مي باشد.

Background & Objectives: Proteases are the most applied industrial enzymes usable in several biotechnological industries. These enzymes include approximately 60% of enzyme marketing worldwide. Alkaline proteases are the most important enzymes which are stable in the presence of alkaline pH, surfactant and oxidizing agents. This study was aimed to isolate and identify the protease producing bacteria from slaughterhouse wastes in Jiroft. Materials & Methods: This cross - sectional study was performed on Jiroft’s slaughterhouse wastes. The protease producing strain was screened on the skim milk agar media. The 16S rRNA genes of the samples were obtained using PCR and sequencing. The protease enzyme was partially purified by ammonium sulphate precipitation, dialysis and ion exchange chromatography. Thereafter, The biochemical features of the enzymes were analysed. Results: The gene sequencing study showed that the isolated strain were 100 % similar to Bacillus tequilensis species. The purified protease showed maximum activity and stability in pH 9 and 40°C. Km and Vmax values were obtained based on Linewewr berg equation 6.77 mg/ml and 64.94 U/ml/min, respectively. Protease stability was improved about 1.8 and 2.4 folds in the presence of cyclohexane and DMSO, respectively. Conclusion: The activity and stability of this enzyme in alkaline pH and in the presence of organic solvents indicates its potential to be used in industries.