مطالعه ماركرهاي بافتي ER، Her-2 و CK5/6 و جهش‏هاي ژن BRCA2 در مردان ايراني مبتلا به سرطان پستان

Study of ER, HER2 and CK5/6 Tissue Tumor Markers and Mutation Screening of BRCA2 Gene in Iranian Males with Breast Cancer

مقدمه: سرطان پستان در مردان بيماري نادري است كه در حدود 1% از همه موارد سرطان پستان را به خود اختصاص مي‏دهد. در بررسي متون مطالعه‏اي در رابطه با سرطان پستان مردان در ايران يافت نشد. به علت شيوع رو به افزايش آن توجه افزون‏تري در اين زمينه مورد نياز است. هدف از اين مطالعه بررسي وجود جهش در ژن BRCA2 و تومور ماركر هاي ER، Her-2 و CK5/6 در بيماران مرد مبتلا به سرطان پستان به منظور نشر دانش و ايجاد انگيزه براي پژوهش در زمينه اين بيماري است. روش بررسي: در اين مطالعه 10 مرد ايراني مبتلا به سرطان پستان بدون در نظر گرفتن زير گروه بافت‏شناسي، سن و سابقه خانوادگي از بيمارستان هاي مهراد، دي و پارسيان انتخاب شدند. بلوك هاي پارافينه از مناطق تومورال برش گيري شدند و برش‏ها تحت رنگ‏آميزي ايمونوهيستوشيمي براي ER، Her-2 و CK5/6 قرار گرفتند. همچنين برش‏هاي لازم براي انجام رنگ‏آميزي هماتوكسيلين و ايوزين تهيه شد. براي تاييد نتايج IHC براي بافت‏هايي كه نتيجه Her-2 آنها(2+)گشته بود تكنيك FISH انجام گرفت. نمونه هاي خون بيماران تهيه و DNA آنها توسط روش Salting out استخراج و كيفيت آنها توسط اسپكتروفتومتري ارزيابي گرديد. پرايمرهاي مناسب براي انجام PCR مخصوص ژن BRCA2 طراحي و نمونه‏هاي DNA بيماران تحت شرايط مناسب دمايي PCR و الكتروفورز گرديد و توسط روش سنجر sequencing) (Sanger توالي يابي شد. يافته ها: نتيجه ER در 8 بيمار مثبت و در 2 نفر از بيماران منفي و نتيجه ماركرهاي CK5/6 و Her-2 در تمام بيماران منفي گرديد. تنها در يك بيمار جهش بي‏معني (Non-sence mutation) در اگزون 25 ژن BRCA2 شناسايي گرديد. اين جهش توسط سايت‏هاي معتبري همانند BIC، HGMD و Mutation taster تاييد گشت. نتيجه گيري: علي‏رغم تعداد كم بيماران در اين مطالعه كه بازتاب نادر بودن بيماري مذكور و با توجه به ساير مطالعات در ديگر كشورها مي‏توان اين گونه استنباط كرد كه اكثر موارد سرطان پستان در مردان در زيرگروهA Luminalقرار مي‏گيرد و از وضعيت تومور ماركرها نمي‏توان براي پيش‏گويي جهش در ژن BRCA2 استفاده كرد. انجام آموزش‏هاي همگاني لازم در زمينه تشخيص زود هنگام اين سرطان در مردان و در نتيجه افزايش آگاهي آنها نسبت به اين بيماري و همچنين ارتقا سطح كيفي روش‏هاي تشخيصي دركشور ضروري به نظر مي‏رسد. همچنين پيشنهاد مي‏شود پژوهش‏هاي گسترده‏تري در راستاي اين مطالعه با تعداد نمونه بيشتر انجام پذيرد.

Introduction: Male Breast Cancer (MBC) is a rare disease accounting for 1% of all breast cancer cases. Literature review reveals no researches about male breast cancer in Iran. More attention is necessary because the disease has an increasing trend. The aim of this study is to screen mutations in BRCA2 gene and its possible relationship with ER, HER-2 and CK5/6 tissue markers in order to increase motivation for better perception about male breast cancer. Methods: In this study, ten Iranian males with breast cancer, regardless of histologic subtypes, age and family history, were selected from the referred cases to Mehrad, Day and Parsian hospitals in Tehran. Paraffin blocks from the tumoral region were sectioned and they were undergone ER, HER-2 and CK5/6 immunostaining. Also sections for hematoxyllin and eosin staining were prepared. For confirming HER-2 positive (score +2) samples, which were assessed by immunohistochemistry, FISH technique was also performed. Blood samples were taken and their DNA was extracted with salting out method, and the qualities of DNA were measured via spectrophotometery. Appropriate primers of BRCA2 gene to perform PCR were designed and DNA underwent amplification and electrophoresis with suitable temperature condition and the products were sequenced by Sanger sequencing method. Results: ER in 2 out of 10 patients and HER-2 and CK5/6 in all of the cases were negative. One nonsense mutation in exon 25 of BRCA2 was found in only one of the patients. This mutation was confirmed to be pathogenic via BIC، HGMD, Mutation taster and Provean sites. Conclusion: Despite low number of patients in this study which is a reflection of the rarity of the disease and according to the other studies in another countries, it could be concluded that most of the male breast cancer cases could be categorized in luminal A subtype and the negativity of the tissue markers can’t be used for the prediction of BRCA2 mutations. Educating the general public for early diagnosis of this type of cancer in men and as a result raising their awareness into this disease and also promoting the quality of diagnostic methods in Iran are necessary. As well, wider researches along with this study with more cases are suggested to be performed.