طراحي و ارزيابي الايزاي غير مستقيم براي تشخيص آلودگي به لينگواتولا سراتا در گوسفند

Development and evaluation of an indirect ELISA test for serodiagnosis of Linguatula serrata infection in sheep

لينگواتولا سراتا انگلي با گسترش جهاني و از بيماري هاي زيونوتيك است. انگل بالغ در مجاري بيني سگ سانان (ميزبان اصلي) و مراحل لاروي آن در كبد، ريه و گره هاي لنفي مزانتري نشخواركنندگان (ميزبان واسط) زندگي مي كند. انسان با خوردن تخم يا نوچه آن مبتلا مي شود. آلودگي آن در ميزبان واسط فاقد نشانه باليني است. تا كنون روش سرولوژيكي براي تشخيص آن در دام ها به ويژه علفخواران ارايه نشده است، بنابراين هدف از اين مطالعه كه براي اولين بار انجام شده است، طراحي و ارزيابي الايزا براي تشخيص آلودگي لينگواتولا سراتا در گوسفند و با استفاده از آنتي ژن هاي دفعي ترشحي و پيكري نوچه انگل بود. آنتي ژن پيكري از نوچه هاي جمع آوري شده از گره هاي لنفي مزانتر گوسفند و هموژنيزه كردن 250 نوچه در 10 ميلي ليتر RPMI-1640 PBS- و آنتي ژن دفعي ترشحي نيز با كشت 200 نوچه در 10ميلي ليتر RPMI-1640 به دست آمد. رقت هاي مناسب سرم، كنژوگه ضد IgG گوسفند، آنتي ژن هاي پيكري و دفعي ترشحي به ترتيب 100 :1، 5000 :1، 1:40 و 1:4 تعيين شد. براي ارزيابي الايزا، 73 نمونه سرم مثبت از گوسفندان آلوده به نوچه انگل و 48 نمونه سرم منفي بره هاي 3-2 ماهه از گله هاي فاقد سگ (در مجموع 121 نمونه) استفاده شد. حساسيت، ويژگي، ارزش پيشگويي مثبت، ارزش پيشگويي منفي و دقت آزمون الايزا با آنتي ژن پيكري به ترتيب 4/90 درصد، 75 درصد، 6/84 درصد، 7/83 درصد و 2/84 درصد، با آنتي ژن دفعي ترشحي نيز به ترتيب 89 درصد، 8/93 درصد، 6/95 درصد، 9/84 درصد و 9/90 درصد برآورد گرديد. آناليز داده ها با SPSS و آزمون مك نمار نشان داد كه آنتي ژن دفعي ترشحي انگل براي رديابي آنتي بادي ضد آن در گوسفند بر آنتي ژن پيكري برتري دارد. بنابراين، آزمون الايزا با به كارگيري آنتي ژن دفعي ترشحي نوچه هاي لينگواتولا سراتا مي تواند براي پايش آلودگي در گوسفند به ويژه در مطالعات همه گيري شناسي و ساير ميزبانان نيز مورد ارزيابي قرار گيرد.

Linguatula serrata as a cosmopolitan parasite is one of the parasitic zoonoses. The adult parasites live in the nasal airways or frontal sinuses of canids as the definitive hosts and larval stages in the liver¸ lung and mesenteric lymph nodes of ruminants as intermediate hosts. Humans may be infected by eating eggs or nymphs of the parasite. All intermediate hosts may be infected without showing any clinical signs. No serological methods presented for detection of the infection in herbivorous animals. In this study, for the first time, an indirect ELISA test was developed for the detection of Linguatula serrata infection in sheep by using somatic and excretory-secretory antigens, isolated from nymphs of the parasite. Nymphs of the parasite were collected from mesenteric lymph nodes of infected sheep and used for preparation of somatic antigens by sonication (250 nymphs/10ml, PBS- RPMI1640). The excretory-secretory antigens were prepared by incubation of the larvae (200 nymphs/10ml) in RPMI-1640 media for 24 h. Appropriate dilutions of sera, anti-Sheep IgG conjugate, somatic and excretory-secretory antigens were determined as 1:100, 1:5000, 1:40 and 1:4 respectively. Evaluation of the ELISA was performed by 121 sera (73 positive and 48 negative). The sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV) and accuracy of the ELISA for somatic antigen were 90.4%, 75.0%, 84.6%, 83.7%, 84.2% and those for excretory-secretory antigen were 89.0%, 93.8%, 95.6%, 84.9% and 90.9%, respectively. Data analysis of the present study by SPSS software and Mac Nemar Test showed that excretory-secretory antigens are better than somatic antigens for detecting of the infection in sheep. Therefore the ELISA test using excretory-secretory antigen of nymphs of Linguatula serrata can be used for detection of infection in sheep, especially in epidemiologic studies and developed for other hosts.