افزايش ميزان بيان ژن Sox2 در سلول هاي فيبروبلاست گاوي با استفاده از TALE-TFs

ژن Sox2 كد كننده يك فاكتور رونويسي موثر در ايجاد و پايداري خاصيت چند تواني سلول هاي بنيادين پستانداران مي باشد. در اين مطالعه توانايي Transcription Activator Like-Effector Transcription Factors (TALE-TFs) جهت افزايش بيان اندوژنوس ژن Sox2 در سلول هاي فيبروبلاست گاوي مورد بررسي قرار گرفت. به اين منظور در ابتدا 320 جفت باز از منطقه پروموتري ژن Sox2 گاوي توالي يابي شد و در ادامه اين توالي با اطلاعات ژنوم انسان موجود در بانك جهاني ژن مقايسه شد. هم رديفي توالي هاي به دست آمده نشان داد كه اين منطقه داراي مشابهت 44/93 درصد با منطقه پروموتري ژن Sox2 انساني است. لذا با توجه به شباهت موجود توالي ها، از يك Sox2-TALE-TF كه قبلاً جهت افزايش بيان ژن Sox2 در سلول هاي انساني استفاده شده بود براي تست فعاليت TALE-TF ها در سلول هاي فيبروبلاست گاوي استفاده گرديد. جهت اندازه گيري ميزان فعاليت TALE-TF ها در سلول هاي فيبروبلاست گاوي از آناليز بيان ژن (qRT-PCR) و يك سيستم گزارشگر رنگ فلورسنت mCherry تحت كنترل پروموتر minCMV استفاده گرديد. بررسي عكس هاي ميكروسكوپ فلورسنت نشان داد كه پروموتر minCMV در سلول هاي فيبروبلاست گاوي به شكل كاملاً قوي عمل مي كند و به عنوان يك گزارشگر براي فعاليت TALE-TF ها قابل استفاده نيست. آناليز نتايج بيان ژن Sox2 گاوي با استفاده از تكنيك qRT-PCR نشان داد كه بيان ژن Sox2 در سلول هاي فيبروبلاست گاوي ترانسفكت شده با Sox2-TALE-TF به ميزان 529/3 برابر افزايش داشته است. نتايج اين تحقيق نشان داد كه TALE-TF ها به عنوان فاكتور هاي رونويسي مصنوعي مي توانند جهت افزايش بيان اندوژنوس ژن ها در سلول هاي گاوي به كار برده شوند.