عنوان مقاله :
ابداع روشي كم‌هزينه و دقيق براي خالص‌سازي فاكتور رشد اپيدرمي انساني نوتركيب (hEGF)
عنوان فرعي :
Development of a Cost Effective Purification Method for Human Epidermal Growth Factor (hEGF) in Recombinant Escherichia coli
پديد آورندگان :
شجاع الساداتي، سيد عباس نويسنده تهران، دانشگاه تربيت مدرس، دانشكده مهندسي شيمي، گروه بيوتكنولوژي، صندوق پستي 114 ـ 14115 Shojaosadati, Seyed Abbas , خليل زاده، رسول نويسنده تهران، دانشگاه صنعتي مالك اشتر، پژوهشكده علوم و فناوري زيستي Khalilzadeh, Rasoul , محمديان، جعفر نويسنده تهران، دانشگاه صنعتي مالك اشتر، پژوهشكده علوم و فناوري زيستي Mohammadian, Jafar , خاني، وجيهه نويسنده يزد، سازمان جهاد دانشگاهي استان يزد، گروه پژوهشي سراميك صنعتي، صندوق پستي 89415145 Khani, Vajiheh
اطلاعات موجودي :
فصلنامه سال 1394 شماره 76
كليدواژه :
اشرشياكلي , تا خوردگي دوباره , خالص‌سازي , فاكتور رشد اپيدرمي انساني , فراتصفيه , نوتركيب
چكيده فارسي :
فاكتور رشد اپیدرمی(EGF) انسانی با 53 اسید آمینه و وزن مولكولی 2/6 كیلو دالتون، پروتئینی با قابلیت تحریك رشد چندین نوع سلول است و به دلیل همین ویژگی در موارد پزشكی و تهیه فراورده های آرایشی كاربردهای بسیاری دارد. در این پژوهش، ابتدا پلاسمید pET23a(+) حاوی ژن EGF به باكتری اشرشیاكلی سویه BL21(DE3) منتقل شد كه سویه نوتركیب به دست آمده قادر به تولید فاكتور رشد اپیدرمی انسانی به صورت درون‌ریز بود. روند خالص سازی استفاده شده در این پژوهش، روشی آسان و به صرفه و دارای سه مرحله اصلی شامل بازكردن تاخوردگی مولكولی و واسرشتگی مولكول‌ها، خالص سازی پایانی به روش فراتصفیه و ایجاد تاخوردگی دوباره مولكول‌های جداشده می‌باشد. در این پژوهش، از روش كروماتوگرافی مایع با كارایی بالا در ستون فاز وارون در كنار آزمایش SDS-PAGE برای سنجش نتیجه های مرحلههای گوناگون خالصسازی استفاده شد. درآخرین مرحله خالص سازی نتیجهه ای هردو آزمایش نشان‌دهنده خلوص بالا برای پروتئین جداشده می‌باشد.
چكيده لاتين :
Human Epidermal Growth Factor (hEGF) with 53 amino acids and a molecular weight of 6.2 KD is a protein that stimulates the growth of various cell types. The purpose of this study was to apply a novel method for purification of the recombinant hEGF that was expressed in recombinant Escherichia coli BL21(DE3). The recombinant strain produced hEGF in form of intracellular so it was necessary to disrupt cell wall of recombinant E. coli and then purify hEGF from inclusion body. Renaturation and purification protocol, which was used in this study, was a simple and efficient one that had three stages including unfolding, purification by means of ultrafiltration and centrifugation and finally refolding of unfolded rhEGF molecules. SDS-PAGE and Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) were used as analytical methods to investigate the results. The purified protein was analyzed by SDS-PAGE and RP-HPLC and the results were shown more than 99% purity.
عنوان نشريه :
شيمي و مهندسي شيمي اي‍ران
عنوان نشريه :
شيمي و مهندسي شيمي اي‍ران
اطلاعات موجودي :
فصلنامه با شماره پیاپی 76 سال 1394
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
