باززايي 6 ژنوتيپ پنبه (Gossypium hirsutum L.) از طريق جنين زايي سوماتيكي

Plant Regeneration from 6 Cotton (Gossypium hirsutum L.) Genotypes Through Somatic Embryogenesis

بهينه سازي روش‌هاي باززايي در پنبه با استفاده از تكنيك‌هاي كشت بافت در اصلاح و توليد موفق ارقام پنبه‌هاي تراريخت ضروري به نظر مي‌رسد. ريزنمونه هاي 14-7 روزه هيپوكوتيل و برگ لپه اي 6 ژنوتيپ پنبه به منظور تحريك كالوس به مدت 10 هفته روي محيط كشت MS1 (محيط كشت MS حاوي ويتامين هاي محيطB5 ) حاوي هورمون هاي اكسين و سيتوكينين با استفاده از آزمايش فاكتوريل بر مبناي طرح كاملاً تصادفي با سه تكرار كشت شدند. كشت ها به اتاقك رشد با شرايط دمايي 2±28 درجه سانتي گراد و دوره نوري 16 ساعت روشنايي با شدت نور 2000 لوكس به منظور القاي كال زايي منتقل شدند. كالوس-هاي جنين زا جهت تحريك و بلوغ جنين ها به محيط كشت هاي MS حاوي NH4NO3 و KNO3 بدون هورمون منتقل شدند. با اينكه KNO3 تاثير ناچيزي جهت تحريك جنين هاي سوماتيكي دارد اما براي نمو و بلوغ جنين ها بيشترين كارايي را دارد. به-منظور جوانه زني جنين هاي سوماتيكي از محيط كشت MS حاوي هورمون GA3 استفاده شد و گياهچه هاي باززا شده از روش جنين زايي سوماتيكي توليد شدند. ژنوتيپ 4-S-4 با هر دو نوع ريزنمونه (هيپوكوتيل و برگ كوتيلدون) از نظر شروع كال زايي، درصد كال زايي و همچنين درصد توليد كال جنين زا برتر از ساير ژنوتيپ‌ها بود.

Optimization of regeneration methods in cotton is necessary to improve and successful production of transgenic cotton cultivars by tissue culture techniques. Present study was conducted to determine the callus induction and plant regeneration of cotton genotypes through In vitro culture and this carried out using hypocotyl and cotyledon explants from 7-14 day-old. For callus induction the explants were cultured on MS1 medium using a factorial experiment based on completely randomized design with three replications and supplemented with a combination of auxin and cytokinin hormones for 10 weeks. Cultures were incubated at 28±2?C under a light intensity of approximately 2000 lux with 16/8 light/dark photoperiod for callus induction. For embryogenesis, embryogenic calli were transferred on a hormone-free MS medium supplemented with NH4NO3 and KNo3. Although, KNO3 is less efficient for somatic embryo induction but it was the best for embryo maturation. For germination of somatic embryos all produced embryogenic calli were cultured on a MS medium supplemented with GA3. Genotype 4-S-4 was better than the other genotypes with both kinds of explants (hypocotyl and cotyledon) in callus initiation, callus induction and embryogenic callus production.