اثر مايع مغزي-نخاعي جنيني بر توانايي تكثير و حفظ حالت بنيادي پروژنيتورهاي عصبي رت نژاد ويستار

Effect of Embryonic Cerebrospinal Fluid on Proliferation and Self-Renewal of Wistar Rat Neuroprogenitor Cells

هدف: در سال‏هاي اخير شواهد چندي، نقش تكويني براي مايع مغزي-نخاعي قايل شده اند. در اين مطالعه تاثير مايع مغزي-نخاعي جنيني بر توانايي تكثير و ويژگي هاي بنيادي بودن سلول‏هاي پروژنيتور عصبي بررسي شده است. مواد و روش‏ها: در اين مطالعه كورتكس جنين‏هاي 5/15 روزه رت نژاد ويستار در شرايط استريل جدا و به‏روش آنزيمي به سوسپانسيون سلولي تبديل گشت. سپس سلول‏ها با تراكم 50 الي 100 سلول در هر ميكروليتر محيط كشت DMEM/F12 حاوي مكمل N2 و فاكتور رشد EGF وFGF-2 كشت داده شد. در گروه كنترل فقط از محيط كشت استاندارد استفاده شد در حالي‏كه گروه‏هاي آزمايشي با مايع مغزي-نخاعي روزهاي مختلف جنيني (16، 18 و 20) به نسبت 10 به 100 (حجمي-حجمي) تيمار شدند. شمارش تعداد نوروسفيرها و بيان ماركر ويمنتين جهت بررسي توانايي تكثير و حالت بنيادي مورد استفاده قرار گرفت. ميزان بقاي سلولي با استفاده از تست MTT سنجيده شد. نتايج بدست آمده از طريق آزمون آناليز واريانس يك طرفه بررسي شد. نتايج : مايع مغزي-نخاعي جنيني روزهاي 16 و18 تعداد نووروسفيرها و همچنين ميزان بقاي سلولي را افزايش داد. نتيجه گيري: مايع مغزي-نخاعي جنيني روزهاي مختلف جنيني به صورت وابسته به زمان تاثيرات متفاوتي بر تكثير و بقاي سلول‏هاي پروژنيتور عصبي مي گذارند. همچنين اين مايع حالت بنيادي سلولهاي پروژنيتور عصبي را در حالت بنيادي تثبيت مي-كند.

Aim: During recent years many studies have suggested some developmental roles for embryonic cerebrospinal fluid. Here we examined the effect of embryonic cerebrospinal fluid on proliferation and self-renewal of embryonic ventricular zone derived neurosphere. Material and Methods: Cortex from 15.5 day old embryonic Wistar rat dissected out and enzymaticaly dissociated to form single cell suspension. Cell suspension seeded in DMEM/F12 medium supplemented with N2 and mitogenes (10ng.ml-1 EGF and 20ng.ml-1 bFGF). The CSF-treated culture from different embryonic ages (E16, E18, and E20) in 10/100 ratio (v/v) was considered as experimental groups. Neurospheres number was counted for proliferation assay and cell viability evaluated with MTT assay. The data were analyzed with One-way ANOVA with turkey’s post hoc test. Results: Embryonic cerebrospinal fluid (e-CSF) enhanced neurosphere number. Also, embryonic cerebrospinal fluid (e-CSF) enhanced cell viability and growth. Conclusion: Embryonic cerebrospinal fluid (e-CSF) enhanced proliferation and viability of neural progenitor cells in age dependent manner. Moreover, this fluid play important role in establishment of neuroprogenitor cells self-renewal. Keywords: Embryonic cerebrospinal fluid, Neurosphere, Proliferation