توليد آنتي‌بادي پلي‌كلونال عليه ناحيه حفاظت‌شده هماگلوتينين ويروس آنفلوآنزا (A/H1N1/2009) سويه تهران: گزارش كوتاه

Production of polyclonal antibody against Tehran strain influenza virus (A/H1N1/2009) hemagglutinin conserved domain (HA2): brief report

زمینه و هدف: ویروس آنفلوآنزا یكی از عوامل مرگ‌ومیر بالا در جهان است. پژوهشگران به استفاده از آنتی‌ژن‌های حفاظت‌شده این ویروس (مانند زیرواحد كوچك مولكول گلیكوپروتیین هماگلوتینین) به‌منظور ساخت واكسن و پژوهش‌های سرولوژیك توجه خاص دارند. این پژوهش با هدف تولید آنتی‌بادی‌های پلی‌كلونال علیه HA2 با كارایی لازم اجرا شد. روش بررسی: این پژوهش از نوع علوم پایه (در زمینه تولید فرآورده) بود و از مهر 1392 تا خرداد 1393 در بخش آنفلوآنزا انستیتو پاستور تهران انجام شد. پروتیین‌ نوتركیب HA2 به‌همراه ادجوانت فروند از طریق عضلانی به خرگوش تزریق شد و كارایی سرم خرگوش به‌وسیله تست‌های نفوذ شعاعی (Radial immunodiffusion, RID) و وسترن‌بلاتینگ بررسی شد. یافته‌ها: در تست‌ RID خط و هاله رسوبی مشاهده شد. همچنین نتایج وسترن‌بلاتینگ برای آنتی‌سرم HA2 مثبت بود. نتیجه‌گیری: نتایج این پژوهش نشان داد كه آنتی‌بادی علیه پروتیین HA2 تولید و پاسخ ایمنی هومورال به‌خوبی القا گردیده است.

Background: The influenza virus is one of the most important factors for higher morbidity and mortality in the world. Recently, researchers have been focused on influenza conserved antigenic proteins such as hemagglutinin stalk domain (HA2) for vaccine production and serological studies. The HA2 plays a major role in the fusion of the virus with host cells membrane. The immunity system enables to produce antibody against HA2. The aim of this study is polyclonal antibody production against influenza HA2. Methods: This study was done in the Influenza Research Lab, Pasteur Institute of Iran, Tehran for one year from September 2013 to October 2014. In the present study, recombinant HA2 protein was produced in prokaryotic system and purified using Nickel affinity chromatography. The purified HA2 was mixed with Freund’s adjuvant (complete and incomplete) and injected into two New Zealand white rabbits by intramuscularly and subcutaneously routes. Immunization was continued for several months with two weeks interval. Before each immunization, blood was drawn by venous puncture from the rabbit ear. Function of rabbitʹs sera was evaluated using radial immunodiffusion (RID) in both forms, Single RID (SRID) and Double RID (DRID). Finally, antiserum activity against HA2 was evaluated using western blotting as serological assay. Results: Sedimentary line and zone was observed in RID assays (SRID and DRID) represent interaction between HA2 protein and anti- HA2 antibody. As well as, western blotting results was positive for HA2 protein. Therefore, these results showed that polyclonal antibody produced against HA2 protein can identify HA2 protein antigenic sites. Conclusion: These findings show that humoral immune responses have properly been stimulated in rabbits and these antibodies can identify HA2 protein and may be suitable for other serological methods.