شناسايي سرولوژيكي و مولكولي ويروس موزائيك كدو در مزارع كدوئيان استان‌هاي خراسان رضوي و شمالي

Serological and Molecular detection of Squash mosaic virus in Cucurbits growing areas of Khorasan Razavi and Northern Khorasan Provinces

موزائیك رگبرگ روشنی خربزه از طریق تشكیل نوارهای سبز رنگ در اطراف رگبرگ در جدایه‌های مختلف خربزه قابل شناسایی است. این بیماری به‌وسیله ویروسی كه دارای nm30 طول است، به‌وجود می‌آید. به منظور بررسی پراكندگی و تعیین موقعیت تاكسونومیكی جدایه‌های SqMV در طی ماه‌های خرداد لغایت مهر ماه 1388 تعداد 270 نمونه گیاهی از مزارع كدوئیان واقع در استان خراسان رضوی و شمالی جمع‌آوری گردید. آلودگی نمونه‌های با آزمون DAS-ELISA به‌وسیله آنتی‌بادی چند همسانه‌ای اختصاصی SqMV اهدایی از شركت Agdia مورد بررسی قرار گرفت. تعداد 46 نمونه از 270 نمونه آلوده به SqMV بودند. از میان نمونه‌های آلوده به این ویروس، هشت نمونه، براساس دامنة میزبانی و منطقه برای بررسی‌های بیشتر و تلقیح مكانیكی بر روی گیاهان محك در شرایط گلخانه انتخاب گردیدند. یك جدایه از تربت جام به منظور تكثیر بخشی از ژن پروتئاز كوفاكتور انتخاب شد. قطعه مذكور (bp226) از طریق واكنش زنجیره‌ای پلیمر از - نسخه‌برداری معكوس با استفاده از RNA كل استخراج شده از نمونه‌های آلوده با كمك آغازگرهای اختصاصی تكثیر و پس از همسانه‌سازی، تعیین ترادف گردید. جهت تعیین جایگاه تكاملی جدایه ایرانی در مقایسه با جدایه‌های مختلف دنیا درخت فیلوژنتیكی توسط نرم افزار MEGA4×1 رسم گردید. نتایج حاصله بیانگر آن است كه بر مبنای ترادف نوكلئوتیدی، جدایه ایران بیشترین تشابه را با جدایه گزارش شده از ژاپن به میزان 97 درصد نشان داد.

Melon veinbanding mosaic is characterized by formation of green vein banding in varieties of Cucumis melo L. The disease is caused by virus of about 30 nm diameter. During a survey in fall and summer of 2008 and 2009, out of 270 samples collected from cucurbit plants from different fields in Khorasan Razavi and Northern Khorasan provinces, 46 samples shown infection of SqMV by DAS-ELISA using specific polyclonal antibody (provided by Agdia company) . Based on host range and sampling location, eight ELISA positive samples were selected for further investigation and were inoculating under plants in greenhouse condition. Specific primers were designed to amplify a fragment (226bp) of SqMV protease gene by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) using the total RNA extracted from SqMV infected samples. Amplified product was sequenced. Phylogenetic analysis with MEGA 4.1 by using 226 nucleotides sequence length of protease gene showed that Torbat-e-Jam isolate is very closed to Y-SqMV from Japan.