تشخيص مولكولي ويروس پاپيلوماي انساني (HPV) با استفاده از PCR اختصاصي بر روي ژن L1 و بررسي فراواني آن در نمونه‏هاي بافتي بيماران مبتلا به سرطان دهانه رحم

Molecular Recognition of Human Papilloma Virus (HPV) Using Proprietary PCR Method Based on L1 Gene and the Evaluation of its Frequency in Tissue Samples from Patients with Cervical Cancer

زمينه و هدف: در سال 1970 ميلادي، ويروس پاپيلوماي انساني (HPV) به عنوان عامل اصلي بروز سرطان دهانه رحم معرفي شد. از آن جا كه با استفاده از روش‏هاي سرولوژيك و كشت سلولي، امكان تشخيص اين ويروس و انواع آن وجود ندارد، روش هاي مولكولي از جمله PCR در تشخيص دقيق، قطعي و زودهنگام اين ويروس از اهميت ويژه‏اي برخوردار هستند. لذا هدف از اين پژوهش، استفاده از يك سنجش PCR اختصاصي بر روي ژن L1 ويروس پاپيلوماي انساني، جهت تشخيص مولكولي HPV و بررسي وفور آن در نمونه‏هاي بيمار مي‏باشد. مواد و روش‏ها: در اين مطالعه تجربي، پس از جمع‏آوري نمونه از ضايعات بدخيم دهانه رحم بيماران مختلف، DNA ويروسي از بلوك‏هاي پارافيني 50 نمونه باليني، استخراج شد و PCR با پرايمرهاي اختصاصي ژن L1 ويروس پاپيلوماي انساني، بر روي نمونه‏هاي فوق انجام گرفت و پس از بررسي محصولات PCR توليد شده بر روي ژل آگارز 2 درصد، حساسيت و اختصاصيت اين تست نيز مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته‏ها: از ميان 50 نمونه بيمار، 33 مورد از نظر وجود عفونت HPV مثبت و 17 مورد HPV منفي بودند كه حاكي از فراواني بالاي HPV در اين جمعيت بيمار (حدود 66 درصد) بود. نتايج ارزيابي اختصاصيت براي نمونه‏هاي پاپيلوما مثبت بوده و حساسيت اين تست، 20 نسخه از سازه نوتركيب حاوي L1 به ازاي هر واكنش بود. نتيجه‏گيري: اين مطالعه نشان داد كه PCR با پرايمرهاي اختصاصي بر روي ژن L1 روشي مناسب و دقيق براي رديابي ويروس پاپيلوماي انساني است و اين يافته‏ها مويد گزارش هاي پيشين مبني بر ارتباط ميان HPV و سرطان دهانه رحم است.

Background: In 1970, human papillomavirus (HPV) was introduced as the main etiologic factor of cervical carcinoma. Since there is no possibility of detecting the virus and its subtypes using serological methods and cell culture, the molecular methods such as PCR have particular importance in accurate, early and definite diagnosis of the virus. So, in this research, our goal is to use a proprietary PCR assay based on L1 gene of human papillomavirus for molecular recognition of HPV and to evaluate its prevalence in patient samples. Materials and Methods: In this experimental study, after collecting of samples from malignant cervical lesions, the viral DNA was extracted from paraffin blocks of 50 clinical samples and PCR was done by specific primers for L1 gene of human papillomavirus in all samples. After the analysis of PCR products by 2% agarose gel electrophoresis, sensitivity and specificity of the test were also evaluated. Results: Among 50 patient samples, 33 cases were confirmed to be positive for HPV infection and 17 cases were negative, showing high frequency of HPV in this patient population (about 66%). The results of specificity assay were positive for papilloma samples and sensitivity of the assay was 20 copies of recombinant construct containing L1 per reaction. Conclusion: This study showed that PCR by specific primers for L1 gene of human papilloma virus is a proper and accurate method for detection of this virus and the results confirm the previous reports of correlation between HPV and cervical carcinoma.