كلون كردن ژن جهش يافته آنتي ژن ايمني بخش باسيلوس آنتراسيس(PA) در باسيلوس سوبتيليس

Cloning the mutated immune antigen of Bacillus Anthracis in Bacillus subtilis

سابقه و هدف: آنتي ژن ايمني بخش باسيلوس آنتراسيس پروتييني با خاصيت اتصال به گيرنده هاي سطح تمام سلول هاي بدن انسان مي باشد. در سطح سلول هاي سرطاني گيرنده اختصاصي فعال كننده يوروكينازي پلاسمينوژن (uPA) ايجاد مي شود كه در سطح ساير سلول هاي نرمال بدن مشاهده نمي شوند. هدف از انجام اين تحقيق تغيير جايگاه اتصال موجود بر روي PA با جهش زايي مستقيم مي باشد به نحوي كه اين پروتيين فقط بتواند به سلول هاي سرطاني متصل گردد. مواد و روش ها: در طي اين تحقيق پلاسميد pMNA1 حاوي ژن PA به روش ليز قليايي ازميزبان خود جدا سازي شد. در ادامه با استفاده از پرايمر هاي فسفريله شده و استفاده از روش PCR هم پوشان جهش هدفدار بر روي ژن PA صورت پذيرفت. در ادامه قطعه حاصله بطور مستقيم بر روي ناقل PTZ57R كلون و به E.coli سويه DH5? انتقال يافت. با استفاده از آنزيم هاي برش دهنده KpnI و SalI ژن PA جهش يافته جدا و بر روي ناقل pWB980 انتقال داده شد. در آخر با استفاده از روش الكتروپوريشن به B.subtilis سويه WB600 انتقال يافت. يافته ها: طي اين تحقيق در توالي ژن PA با روش SOE PCR جهش ايجاد كرده كه در پي آن كد ژنتيكي اسيد آمينه 194 تغيير كرد. جهش ايجاد شده با تعيين ترادف بازي تاييد گرديد. نتيجه گيري: سرطان مشهور به بيماري غير قابل درمان و مرگ آور است. يكي از روش هاي درمان سرطان استفاده از توكسين هاي باكتريايي است البته در صورتي كه فقط به سلول هاي سرطاني آسيب برساند. لذا با استفاده از پروتيين تغيير يافته PA كه فقط به سلول هاي سرطاني متصل مي گردد مي توان اميدي تازه در درمان سرطان ايجاد كرد.

Background and Objectives: The immune antigen of Bacillus anthracis is a protein that can attach to the surface receptor of all human cells. At the surface of cancer cells there is a receptor that activate the uPA (Urokinase plasminogen) that the normal human cells do not. This research was conducted to change the site of attachment of PA gene with making direct mutation so that it can be attach only to the cancer cells Material and Methods: In this study, pMNA1 plasmid that contained PA gene was extracted from its host by basic lyse. Then, phosphorylized primers and Overlap Extention PCR were used to make mutation on PA gen. The mutated segment was directly cloned in PTZ57R carrier and transferred into DH5? strain of E. coli. By catalyst enzymes KpnI and SalI the mutated PA gene was extracted and transferred on pWB980and by the electroporation method transferred to WB600 strain. Results: In this study mutation was occurred in sequences of PA gene by SOE PCR method that resulted change in the genetic code of amino acid 194. The occurring of mutation was confirmed by determining of base sequences. Conductions: Cancer is a serious disease that in many cases lead to death. One of the treatment method of cancer is bacterial toxins if only the cancer cells receive them. So using the changed PA can be a hope in cancer treatment as it attach only to cancer cells.