تنوع ژنتيكي اگزون 9 ژن فسفو انول پيروات كربوكسي كيناز ميتوكندريايي در سويه هاي مختلف مرغ با استفاده از تكنيك PCR-RFLP

Genetic variability in exon 9 of PEPCK-M gene in different strains of chickens using PCR-RFLP method

فسفو انول پيروات كربوكسي كيناز، اولين مرحله واكنش را در چرخه گلوكونيوژنز كاتاليز مي كند. دو فرم ايزوزيمي از اين آنزيم، شامل فسفو انول پيروات كربوكسي كيناز سيتوپلاسمي و فسفو انول پيروات كربوكسي كيناز ميتوكندريايي (PEPCK-M) وجود دارد كه در سيتوپلاسم و ميتوكندري حضور دارند. پژوهش حاضر براي مقايسه چند شكلي هاي آللي در جايگاه ژني PEPCK-M در سويه هاي مرغ تجاري گوشتي، تخم گذار و مرغ هاي مولد از ايستگاه اصلاح نژاد مرغ بومي مازندران انجام گرفته است. نمونه هاي خون به طور تصادفي از 150 قطعه مرغ از اين سه جمعيت جمع آوري و استخراجDNA باروش نمكي بهينه يافته انجام شد. يك قطعه ي 401 جفت بازي از اگزون 9 ژن PEPCK-Mتكثير و سپس جهت تعيين ژنوتيپ، محصولات PCR با آنزيم برشي AccI مورد تيمار آنزيمي قرار گرفتند. فراواني هر يك از آلل-هاي AccI– وAccI+ به ترتيب در مرغ بومي مازندران برابر با 73/0 و 27/0، در مرغ گوشتي برابر با 6/0 و 4/0 و در مرغ تخم گذار برابر با 85/0 و 15/0 محاسبه شد. دو ژنوتيپ AccI-/- و AccI+/- با فراواني هر يك به ترتيب 46/0 و 54/0 در جمعيت مرغ بومي مازندران، 2/0 و 8/0 در جمعيت مرغ گوشتي و 7/0 و 3/0 در جمعيت مرغ تخم گذار مشاهده شد. مقايسه فراواني ژني بين جمعيت مرغ هاي بومي مازندران با مرغ هاي گوشتي و تخم گذار اختلاف معني داري نداشت، اما اين اختلاف در بين جمعيت مرغ هاي گوشتي و تخم گذار از لحاظ آماري معني دار بود (P < 0.05). همچنين مقايسه فراواني ژنوتيپي بين هر سه جمعيت از لحاظ آماري اختلاف معني داري را نشان داد(P < 0.05) . در نمونه هاي مورد مطالعه ژنوتيپ AccI+/+ مشاهده نشد. اختلاف در توزيع ژنوتيپي ممكن است در نتيجه اختلاف در استراتژي هاي انتخاب استفاده شده در اين جوامع باشد. با توجه به اينكه ژن PEPCK-M در جمعيت هاي مورد بررسي داراي چند شكل? قابل ملاحظه اي م? باشد م? توان از آن در برنامه هاي انتخاب و اص?ح نژادي آ?نده استفاده نمود.

Phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK) catalyzes the first step of the gluconeogenesis cycle. There are two isozymes forms of this enzyme, cytosolic phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK-C) and mitochondrial phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK-M) which present in mitochondria and cytoplasm Current research has been conducted to identify the allelic polymorphism in the PEPCK-M gene in breeder hens of native fowls and commercial broiler and layer chickens. Blood samples were collected randomly from 150 birds of three strains and DNA was extracted using modified salting out method. A fragment of 401 bp in length was amplified from exon 9 of PEPCK-M gene. For genotyping of each sample the PCR products were digested by AccI restriction enzyme. The frequency of AccI- and AccI+ allele was estimated at 0.73 and 0.27 in native fowls population, 0.6 and 0.4 in broiler and 0.85 and 0.15 in layer lines, respectively. Two genotypes of AccI -/- and AccI -/+ were observed with the frequency of 0.46 and 0.54 in native fowls, 0.20 and 0.80 in broiler line and 0.70 and 0.30 in commercial layer line, respectively. The comparison of allelic frequency showed no statistical differences between native fowls population with broiler and layer lines, but this results indicated significantly differences between broiler and layer lines (P < 0.05).The comparison of genotypic frequency showed that there were significant differences between three populations (P < 0.05). No any AccI +/+genotype was detected in the genotyped samples. The difference in genotypic distribution may be as a consequence of different selection strategies used in these populations.