كلونيزاسيون كانديدايي در نوزادان بخش مراقبت‌هاي ويژه و شناسايي گونه‌ها با روش‌هاي قارچ‌شناسي و مولكولي

Candida colonization and species identification by two methods in NICU newborn

زمینه و هدف: در دو دهه گذشته افزایش موارد كاندیدیازیس مهاجم در بخش مراقبت‌های ویژه نوزادان، قابل توجه بوده است. كلونیزاسیون با كاندیدا، اولین مرحله در پاتوژنز بیماری بوده و تعدد كانون‌های كلونیزه با افزایش احتمال عفونت مهاجم همراه است. این مطالعه با هدف تعیین كلونیزاسیون كاندیدایی نوزادان بستری در بخش مراقبت‌های ویژه به عمل آمد. روش بررسی: در یك پژوهش مقطعی در طی 9 ماه (مرداد 1392 تا اردیبهشت 1393)، 93 نوزاد در بخش مراقبت‌های ویژه در بیمارستان‌های امام‌خمینی (ره) و مركز طبی كودكان تهران مورد بررسی قرار گرفتند. نمونه‌برداری از پوست و مخاط در روزهای اول، سوم و هفتم بستری به عمل آمد. جهت جداسازی و تشخیص مورفولوژیك قارچ از محیـط‌های كشت كـروم آگـار كـاندیـدا و كورن میل آگار+ تویین 80 استفاده گردید و شناسایی نهایی ایزوله‌ها توسط تكنیك PCR-RFLP انجام شد. یافته‌ها: كلونیزاسیون كاندیدایی در 43/20% بیماران مشاهده گردید. 15 نوزاد با یك گونه و چهار نوزاد با دو گونه كاندیدا كلنیزه شدند. ایزوله‌ها به‌ترتیب فراوانی شامل، كاندیدا پاراپسیلوزیس (10 ایزوله)، كاندیدا آلبیكنس (هفت ایزوله) كاندیدا تروپیكالیس (سه ایزوله)، كاندیدا گیلرموندی (دو ایزوله) و كاندیدا كروزه‌ای (یك ایزوله) بودند. به این ترتیب گونه‌های كاندیدای غیر آلبیكنس (56/69%) غالب بوده و كاندیدا پاراپسیلوزیس بیشترین فراوانی را در بین ایزوله‌های كاندیدایی داشت. در این پژوهش بین كلونیزاسیون كاندیدایی با وزن تولد پایین، نارس بودن نوزاد و طول مدت اقامت در بیمارستان، از نظر آماری ارتباط معناداری (003/0P=) وجود داشت. نتیجه‌گیری: در این بررسی كلونیزاسیون كاندیدایی نوزادان با غالب بودن گونه كاندیدا پاراپسیلوزیس (47/43%) مشاهده شد. بنابراین خطر عفونت مهاجم با این گونه در نوزادان قابل توجه می‌باشد.

Background: Over the last two decades invasive candidiasis has become an increasing problem in neonatal intensive care units (NICUs). Colonization of skin and mucous membranes with Candida spp. is important factor in the pathogenesis of neonatal infection and several colonized sites are major risk factors evoking higher frequencies of progression to invasive candidiasis. The aim of this study was to detect Candida colonization in NICU patients. Methods: This cross-sectional study was conducted on 93 neonates in NICUs at Imam Khomeini and Children Medical Center Hospitals in Tehran. Cutaneous and mucous membrane samples obtained at first, third, and seventh days of patients’ stay in NICUs during nine months from August 2013 to May 2014. The samples were primarily cultured on CHROMagar Candida medium. The cultured media were incubated at 35°C for 48h and evaluated based on colony color produced on CHROMagar Candida. In addition, isolated colonies were cultured on Corn Meal Agar medium supplemented with tween 80 for identification of Candida spp. based on their morphology. Finally, polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method was performed for definite identification of isolated species. Results: Colonization by Candida spp. was occurred in 20.43% of neonates. Fifteen and four patients colonized with one and two different Candida spp., respectively. Isolated Candida spp. identified as; C. parapsilosis (n: 10), C. albicans (n: 7), C. tropicalis (n: 3), C. guilliermondii (n: 2), and C. krusei (n: 1). In present study non-albicans Candia species were dominant (69.56%) and C. parapsilosis was the most frequent isolate (43.47%). Using Fisherʹs exact test, the correlation between fungal colonization with low birth weight, low gestational age, and duration of hospital stay was found to be statistically significant (P=0.003). Conclusion: The results of this study imply to the candida species colonization of neonates. Neonates in NICU are at the highest risk for severe infection with Candida parapsilosis. Therefore, isolation of C. parapsilosis as the most common species (43.47%) in present study was noteworthy.