تجزيه و تحليل تنوع و جايگاه ژنتيكي قوچ و ميش هاي پناهگاه حيات وحش بوروييه با كمك ژن سيتوكروم ب (Cytochrome b)

Genetic and Phylogenetic Analysis of Cytochrome b region in Wild Sheep of Buruieh Wildlife Refuge

قوچ و ميش از خانواده گاوها (Bovidae) و جنس قوچ (Ovis) است، كه در بيشتر مناطق ايران زيست مي كند. به لحاظ تعيين طبقه بندي اين گونه همواره چالش هاي زيادي در بين محققين وجود داشته است. هدف از اين مطالعه، بررسي ژنتيكي و فيلوژنتيكي توالي نوكليوتيدي ناحيه سيتوكروم b از DNA ميتوكندري قوچ و ميش هاي پناهگاه حيات وحش بوروييه به منظور تعيين طبقه بندي صحيح اين گونه است. در اين پژوهش، تعداد 17 نمونه سرگين و بافت از قوچ و ميش هاي پناهگاه حيات وحش بوروييه شهرستان خاتم جمع آوري شد. پس از استخراج DNA، تكثير قطعات 1140، 741 و 765 جفت بازي از ناحيه سيتوكروم b ميتوكندري با استفاده از واكنش زنجيره اي پليمراز و پرايمرهاي (Cytb F- (Cytb Rو Cytb F-Cytbin R)، Cytb R-Cytbin F) انجام گرديد. توالي يابي ناحيه تكثير شده با استفاده از دستگاه خودكار ABI 3130 به روش اتوماتيك سانگر صورت گرفت و به منظور تعيين فاصله ژنتيكي با توالي هاي حاصل از مطالعات ديگر، مقايسه شد. نتايج نشان داد كه در بين توالي هاي نوكليوتيدي نمونه-هاي مورد مطالعه، تفاوت هاپلوتايپي وجود نداشت. نتايج آزمون فيلوژنتيكي با استفاده از روشNeighbor-Joining نشان داد، قوچ و ميش هاي پناهگاه حيات وحش بوروييه در شاخه قوچ و ميش ارمني (Ovis orientalis) قرار مي گيرند و از لحاظ هاپلوتايپي با جمعيت هاي قوچ و ميش ارمني در ديگر مناطق ايران متفاوت هستند. نتايج حاصل از اين پژوهش نشان داد كه قوچ و ميش هاي پناهگاه حيات وحش بوروييه در حال حاضر تنوع ژنتيكي پاييني دارند، كه در كارهاي مديريتي دراز مدت در آينده بايد به طور جدي به آن توجه شود

Wild sheep is belonging to Bovidae family and genus ovis which living in the most regions of Iran. There are many challenges between researchers about Wild Sheep species taxonomy. This study aims to investigate genetic and phylogenetic analysis of cytochrome b region of ovis orientalisʹs mtDNA in the Buruieh wildlife refuge in order to determine the correct taxonomy. With this regard, 17 samples of ovis orientalis stool and tissue were collected from Buruieh Wildlife Refuge in Khatam Township. After DNA extraction 1140, 741, 765 bp fragment of the mitochondrial cytochrome b was amplified with primers Cytb F-Cytb R, Cytb F- Cytbin R and Cytb R-Cytbin F under polymerase chain reaction .Amplified fragments were sequenced by ABI 3130 automated device with Sanger method. The results were compared with sequences from other studies to determine the genetic distances. Hoplotype variations were not observed in the nucleotide sequences obtained in this study. Using the Neighbor-Joining phylogenetic test results showed that the Buruieh Wildlife Refuge wild sheep is placed in the group of ovis orientalis and is different from other ovis orientalis populations all around Iran in the terms of Hoplotype. Our results demonstrated that the Buruieh Refuge Wildlife Sheeps have low genetic diversity which should be considered at the long-time managment activities in the future.