ايجاد سازواره ژني گلوكاناز باكتري باسيلوس سوبتيليس در اشريشيا كلي

Construction of glucanase gene of Bacillus subtilis in Escherichia coli

چكيده سابقه و هدف: غلات به عنوان تغذيه اصلي طيور مطرح مي باشد. غلات داراي ميزان قابل توجهي پلي‌ساكاريد غيرنشاسته‌اي (NSP) محلول مي‌باشند. NSP منجر به افزايش اثرات منفي و ناسازگاري در طيور مي‌شوند. مكمل آنزيمي بتاگلوكاناز با تجزيه‌ پلي‌ساكاريدهاي غيرنشاسته‌اي ويسكوزيته محتويات هضمي دستگاه گوارش را كاهش مي‌دهد و جذب روده‌اي را بالا مي‌برد. اين مطالعه با هدف ايجاد سازواره‌ ژني گلوكاناز باكتري باسيلوس سوبتيليس در باكتري اشريشيا كلي انجام شد. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي و روش واكنش زنجيره‌اي پلي مراز توالي كامل ژن گلوكاناز از باكتري باسيلوس سوبتيليس تكثير شد. پس از خالص سازي، ژن bgl با استفاده از روش T/A Cloning در وكتور pGEM كلون گرديد. سپس ساختار پلاسميدي pGEM-bgls در باكتري اشريشيا كلي سويه Top-10 ترانسفورم شد. باكتري ترانسفورم شده به محيط جامد LB محتوي آمپي سيلين (100 ميكروگرم در هر ميلي ليتر) منتقل شد. پلاسميد نوتركيب ترانسفورم شده در اشريشيا كلي سويه Top-10 و كلني هاي حاوي پلاسميد به روش PCR انتخاب شد. تاييد نهايي سازواره حاصل به روش هضم آنزيمي صورت گرفت. يافته ها: نتايج نشان داد كه همسانه‌سازي ژن گلوكاناز در باكتري اشريشيا كلي به درستي صورت گرفته است. واكنش زنجيره‌اي پلي مراز همسانه سازي ژن 767 جفت بازي گلوكاناز را تاييد نمود. نتيجه گيري: اين پژوهش با ساخت سازواره ژني گلوكاناز از باكتري باسيلوس سوبتيليس و كلون كردن آن در باكتري اشريشيا كلي مي‌تواند كانديداي جديدي در توليد پروبيوتيك براي دام و طيور معرفي نمايد.

Abstract Background & Objectives: The grains are considered as the main food for poultries. Grains contain significant content of non- soluble starch polysaccharides (NSP). NSPs cause negative impact and incompatibility in birds. Digestion of NSP contents by B-glucanase enzyme supplement reduces the viscosity of polysaccharides in the digestive tracts, and increases their intestinal absorption. The aim of this study was to construction of glucanase gene of Bacillus subtilis in Escherichia coli. Materials & Methods: In this experimental study, the glucanase gene of B. subtilis was amplified using specific primers and polymerase chain reaction. After purification of the bands, Bgl gene was cloned by T/A cloning technique in pGEM vector, and was transformed in E. coli. Afterward, the pGEM-bgl was transferred into E. coli Top-10 strain. The recombinant vectors were then transformed into E. coli competent cells, and the recombinants were plated on LB agar containing 100 µg/ml ampicillin. The recombinant plasmid transformed to E. coli Top10 cell and the colonies carrying plasmid were selected by PCR. The presence of glucanase construction was confirmed by enzymatic digestion. Results: The results showed that the glucanase gene was successfully cloned in E. coli. The results of cloning of 767 bp glucanase gene was confirmed by PCR assay. Conclusion: The construction of B. subtilils glucanase gene and cloning of this gene in E. coli is a strong alternative for the production of probiotic used for poultry.