همسانه سازي تمام طول ژن E2از ژنوتيپ 2aاسترين JFH1ويروس هپاتيت سي درون وكتور PET28aو انتقال آن به باكتري اشريشياكلي سويه DH5a

Cloning of hepatitis C virus E2 gene full-length from genotype 2a (JFH1) to pET28a (+) vector and transform an Escherichia coli DH5α strain

سابقه و هدف: پوشش گليكوپروتييني E2 ويروس هپاتيت سي براي ورود ويروس به سلول هاي ميزبان مورد نياز است، همچنين به دليل اختلاف توالي نوكليوتيدي در ناحيه C ترمينال ژن E2 تنوع ويروسي به وجود مي آيد كه موجب پايداري عفونت مي گردد، در نتيجه اين ژن هدف اصلي براي توليد آنتي بادي هاي خنثي كننده و ساخت واكسن مي باشد. در اين تحقيق نيز جهت مطالعات مقدماتي، تمام طول ژن E2 از ژنوتيپ 2a استرين JFH1 ويروس هپاتيت سي درون وكتورpET28a(+) قرار گرفته و به درون باكتري E-coli انتقال يافته است. مواد و روش ها: ژن ناحيه E2 از ژنوتيپ2a استرين JFH1 ويروس هپاتيت سي پس از طراحي پرايمرهاي داراي جايگاه آنزيم هاي محدودگر EcoR1 و Nde1 توسط واكنش PCR تكثير گرديد و محصول آن پس از تاييد درون وكتورpET28a(+) نوتركيب گشت، سپس به روش شوك حرارتي درون سلول باكتري E-coli سويه DH5?، ترانسفورم شده و تاييد گرديد. يافته ها: همسانه سازي ژن E2 به صورت تمام طول درون وكتورpET28a(+) با موفقيت انجام شد و سازه نوتركيب (pET28a – E2) به درون سلول باكتريE-coli DH5? منتقل شده و تاييد گرديد. نتيجه گيري: ساخت وكتور نوتركيب pET28a(+) داراي ناحيه تمام طول ژن E2 از ژنوتيپ 2a استرين JFH1 ويروس هپاتيت سي و انتقال به درون باكتري E-coli اين امكان را فراهم مي كند تا جهت بيان ژن مزبور در سويه هاي بياني از اين وكتور نوتركيب استفاده شود.

Aim and Background: The envelope glycoprotein E2 in Hepatitis C virus is required for host-cell entry. The nucleotide sequence diversity in carboxyl-terminus (C-terminal) of this gene results in induction of neutralizing antibody that makes this gene an important target for vaccine development studies. In this study we tried to make a recombinant pET28a (+) containing full length of the E2 gene from genotype 2a (JFH1) and transform it to the E-coli (DH5a). Material and Methods: Full-length of HCV E2 region from genotype 2a (JFH1) was amplified by PCR reaction using the specific primers including the restriction sites for EcoR1 and Nde1. The confirmed PCR product was cloned into the pET28a (+) vector and transformed into the E-coli (DH5a) by using the heat shock method. Results: The HCV E2 gene was successfully cloned into the pET28a (+) vector in full length size. Transformation of the E-coli strain DH5a by this recombinant vector was confirmed. Conclusion: Transformation of the E-coli (DH5a) by using the recombinant vector pET28a- HCV 2a (JFH1) E2 gene provides useful tools for further expression of this gene in full length size in different expression system.