مقايسه snRNA-U6 و microRNA-16 براي تعيين ژن كنترل درون‌زاد مناسب براي بررسي بيان ژن‌هاي microRNA تحت تيمار كوركومين دندروزومي در رده‌هاي سلولي سرطان كبد

Comparison of snRNA-U6 and microRNA-16 for Identification of Suitable Endogenous Control Gene for microRNA Gene Expression Analysis under Dendrosomal Curcumin Treatment in Hepatocellular Carcinoma Cel

microRNAها RNAهاي كوچك تك رشته‌اي با طول 18-25 نوكليوتيد است كه با مهار ترجمه و برش mRNA در تنظيم بيان ژن شركت دارد. بيان ناهنجار microRNAها از عوامل رخداد بيماري‌هاي مختلف است كه اين مسيله علاقه به بررسي نمايه بيان آن‌ها را افزوده است. RQ-PCR تكنيكي كمّي و حساس در بررسي بيان ژن‌هاست. براي تصحيح تغييرات سيستماتيك از جمله ميزان الگوي آغازين، كيفيت RNA، كارآيي آنزيم‌ها داده‌هاي RQ-PCR نسبت به يك ژن كنترل درون‌زاد كه در مجموعه نمونه‌هاي آزمون به‌طور پايدار بيان مي‌شود، استاندارد‌سازي مي‌شود. براي جلوگيري از رخداد خطاهاي بيشتر در زمينه كمّي‌سازي داده‌هاي بيان، ارزيابي ژن‌هاي كنترل درون‌زاد كانديد براي هر نمونه آزمايش ضروري است. در اين مطالعه بيان ژن‌هاي microRNA-16 و snRNA-U6 در رده‌هاي سلولي سرطاني كبد تحت تيمار با كوركومين دندروزومي به منظور تعيين كنترل درون‌زاد مناسب براي مطالعات سنجش بيان microRNAها مرتبط با كوركومين دندروزومي ارزيابي شد. مواد و روش‌ها: رده‌هاي سلولي مورد نظر توسط كوركومين دندروزومي تيمار شدند. ورود كوركومين دندروزومي به رده‌هاي سلولي HepG2 و HuH-7 با تصويربرداري توسط ميكروسكوپ فلورسنت بررسي شد. RNA از نمونه‌هاي مورد نظر استخراج و سنتزcDNA با روش افزودن دم پلي A انجام شد. سپس توسط روش RQ-PCR سنجش بيان صورت گرفت. نتايج: نتايج نشان داد U6 يا تركيبي از U6 و miRNA-16 براي HuH-7 و miRNA-16 براي HepG2 در اين شرايط تيمار براي ژن كنترل درون‌زاد مناسب است. نتيجه‌گيري: در مجموع مي‌توان از اين ژن‌هاي كنترل درون‌زاد به دليل عدم تغيير بيان معني‌دار و پايداري بيان بين نمونه‌هاي آزمون، براي سنجش بيان microRNAها تحت تيمار با كوركومين دندروزومي در اين رده‌هاي سلولي استفاده كرد.

MicroRNAs (miRNAs) are single-stranded small RNAs 18-25 nucleotides in length that regulate gene expression through translational inhibition and mRNA cleavage. Aberrant expression of miRNAs contribute to several diseases. This has increased interest in profiling the expressions of these molecules. Real-time quantitative PCR (RQ-PCR) is a sensitive, quantitative technique for gene expression assessment. To correct for systematic variables such as the amount of starting template, RNA quality and enzymatic efficiencies, RQ-PCR data is commonly normalized to an endogenous control gene which is stably-expressed across the test sample set. To avoid occurring further error in the quantification of gene expression data, it is necessary that candidate endogenous controls be validated in the samples of interest. In this study the expression of miRNA-16 and small nuclear RNA (snRNA)-U6 in hepatocellular carcinoma (HCC) cell lines under dendrosomal curcumin treatment were evaluated to identify appropriate endogenous controls for dendrosomal curcumin-related miRNA expression assays. Methods: HCC cell lines were treated with dendrosomal curcumin. Dendrosomal curcumin entry into HepG2 and HuH-7 cells was assessed by fluorescent microscopy images. RNA was extracted and cDNA, after polyA polymerization, was synthesised. Then, we performed gene expression assays using RQ-PCR. Results: In this treatment condition, miRNA-16 for HepG2, snRNA-U6 and the combined miRNA-16 and snRNA-U6 for HuH-7 were suitable endogenous controls. Conclusion: These genes are appropriate endogenous controls for miRNA expression assays in HCC cell lines under treatment with dendrosomal curcumin. There are stable, non-significant expression changes of these genes.