تاثير سيستم هم‌كشتي سلول‌هاي لوله فالوپ موش بر تكثير سلول‏هاي بنيادي آندومتر انساني

The Effect of a Co-culture of Mouse Fallopian Tube Cells on Proliferation of Human Endometrial Stem Cells

بررسي تاثير سيستم هم‌كشتي سلول‌هاي لوله فالوپ موش بر تكثير سلول‏هاي بنيادي استروماي آندومتر انساني مواد و روش‏ها: سلول‏هاي آندومتر از نمونه‌هاي هيستركتومي استخراج شد. سپس سلول‌ها با استفاده از روش هضم آنزيمي و كلاژناز تيپ 3 جداسازي شدند و پس از آن سلول‌ها به‌ترتيب از فيلترهايي به ابعاد 150 و 45 ميكرومتر عبور داده شدند و در محيط كشت DMEM+F12 كشت شدند. در پايان پاساژ چهارم براي تاييد ماهيت مزانشيمي سلول‌ها، از نشانگر CD90 استفاده شد و سلول‌هاي CD90 مثبت با استفاده از روش فلوسايتومتري بررسي شدند. سپس سلول‌هاي حاصل از كشت مرحله چهارم در دو گروه استفاده شد. در يك گروه، پس از كشت سلول‌هاي لوله فالوپ موش و تهيه تك لايه از آن‌ها، سلول‌ها با ميتومايسين c غير فعال شد و به‌عنوان لايه پشتيبان استفاده شد و در گروه ديگر به تنهايي كشت شد. نرخ تكثير در هر دو گروه (سلول‌هاي بنيادي آندومتر بدون هم‌كشتي با لوله فالوپ و با هم‌كشتي) با استفاده از آزمون MTT بررسي و سپس مقايسه شد. نتايج: سلول‏هاي آندومتر انساني 24 ساعت پس از كشت به كف فلاسك چسبيدند و با گذشت 72 ساعت اين سلول‏ها دوكي شكل شدند و از نظر مورفولوژي شبيه به سلول‏هاي فيبروبلاست شدند. ميزان سلول‏هاي CD90 مثبت در انتهاي پاساژ چهارم 08 /0±26/94 درصد بود. نرخ تكثير در سلول‏هاي بنيادي استروماي آندومتر تحت هم‏كشتي و سلول‏هاي بنيادي بدون هم‌كشتي با لوله فالوپ به‌ترتيب 02/0±1/1 و 17/0±17/1 بود و بين اين دو گروه تفاوت معني‌دار ديده نشد. نتيجه‌گيري: هم‌كشتي با سلول‌هاي لوله فالوپ موش تاثيري بر افزايش تكثير سلول‌هاي بنيادي استروماي آندومتر ندارد.

This study evaluates the effect of a mouse fallopian tube cell co-culture on the proliferation of human endometrial stromal cells. Methods: We used hysteroscopy to collect the endometrial cells from the uterus. The cells were isolated with collagenase type 3 and passed through 150 µm and 40 µm filters, respectively, after which the isolated cells were cultured in DMEM/F12 medium. At the end of the fourth subculture we used flow cytometry to evaluate the percentage of CD90 positive cells. The endometrial cells were co-cultured with mitomycin C-treated cells from the mouse fallopian tube as the experimental group. Those cultured without the feeder layer were considered the control group. The proliferation rate of cells in both groups were compared by the MTT assay Results: The endometrial cells adhered to the floor of the plate after 24 hours. After 72 hours, they had a spindle shape which was similar to fibroblasts. The rate of CD90 positive cells at the fourth passage was 94.26 ± 0.08%. The proliferation rate of the co-culture experimental group was 1.1 ± 0.02 and for the control group, it was 1.17 ± 0.17 which was not significantly different. Conclusion: Co-culture of mouse fallopian tube cells with endometrial stem cells did not affect the proliferation rate of endometrial stem cells.