كاهش سطوح بيان رسپتور پلاكتي GPIbα به‌واسطه ريزش خارج غشايي در فرآورده‌هاي پلاكتي تغليظ شده از پلاسماي غني از پلاكت

The expression loss of GPIbα due to ectodomain shedding in PRP derived platelet concentrates during storage

زمینه و هدف: شواهد بارزی از فعالیت ناخواسته پلاكت‌ها در طی نگهداری وجود دارد كه می‌تواند منجر به افزایش بیان و ریزش رسپتورهای عملكردی آن‌ها از جمله GPIbα و در نهایت آسیب‌های دوران نگهداری پلاكت‌ها گردد. هدف از این مطالعه بررسی الگوی بیان و ریزش رسپتور GPIbα در حین نگهداری فرآورده پلاكتی كنسانتره می‌باشد. روش بررسی: مطالعه حاضر به صورت تجربی از شهریور ماه سال 1393 تا ابتدای سال 1394 با بررسی فرآورده‌های پلاكتی حاصل از Platelet-rich plasma (PRP) در سازمان انتقال خون ایران انجام پذیرفته است. سطوح بیان GPIbα در كنسانتره پلاكتی حاصل از PRP با تكنیك فلوسایتومتری و میزان ریزش این مولكول متعاقب اولتراسانتریفوژ با استفاده از تكنیك وسترن بلات در روزهای یك، سه و پنج پس از ذخیره سازی سنجیده و مقایسه شد. یافته‌ها: میزان بیان GPIbα در روز اول نگهداری (9/5±86 Mean fluorescence intensity, MFI=) بود كه تا روز پنجم به شكل معناداری كاهش یافت (0094/0P=) و به سطح بیان (7/7±61 MFI=) رسید. همچنین مقادیر به‌دست آمده از GPIbα محلول (گلیكوكالیسین) در روز اول (3/0+31/0)، سوم (6/0+06/1) و پنجم (4/0+5/1)، حاكی از افزایش معنادار ریزش این رسپتور با (0098/0P=) در روز اول نسبت به روز پنجم می‌باشد. نتیجه‌گیری: با توجه به میزان كاهش معنادار سطوح رسپتور عملكردی GPIbα پلاكت‌ها در طول نگهداری، به نظر می‌رسد كه نگهداری فرآورده‌های پلاكتی به‌خصوص تا روز پنجم كارایی آنها را جهت مصارف بالینی كاهش دهد ضمن اینكه تزریق فراورده‌ای با مقادیر بالای GPIbα محلول نیز ممكن است منجر به عوارض پیش التهابی و اختلال چسبندگی گردد.

Background: Platelet adhesion typically occurs by the critical role of GPIb-V-IX in capturing free-flowing platelets to the injured vessel wall where its rapid binding kinetics enables platelet tethering even under conditions of high shear through the interaction of the major ligand-binding subunit of GPIb-V-IX, GPIbα with subendothelial-bound vWF. During storage, platelet undesired activation may lead to platelet storage lesion (PSL) which changes the expression levels of platelet functional receptors including GPIbα. This study investigates the levels of expression and ectodomain shedding of platelet adhesive receptor GPIbα during the storage of platelet rich plasma (PRP) concentrates (PRP- PCs). Methods: Five PRP-platelet concentrates were obtained from Iranian Blood Transfusion Organization (IBTO). The GPIbα expressions of platelets were analyzed on day 1, 3 and 5 after storage using flowcytometry. To examine the ectodomain shedding of this receptor the microparticle free supernatants obtained from stored platelets were subjected to western blot analysis. For control study, blood specimens was drawn from healthy consenting individuals and resting platelets were isolated while resuspended in Tyrode buffer. Results: Our results indicated a continuous decrease of GPIbα expression during storage where the expression from fist day (Mean fluorescence intensity=86±5.9) was significantly reduced compared to that of fifth day (mean fluorescence intensity=61±7.7) after storage (P=0.0094). Conversely, shed GPIbα (Glycocalicin) demonstrated continuous elevation during five-day storage (P=0.0098). According to the results the shedding levels for the first day were increased from 0.31± 0.3 to 1.5± 0.4 by the day 5 after storage.   Conclusion: Our study has demonstrated significant loss of platelet GPIbα during storage mostly due to receptor ectodomain shedding that leads to significant increase of soluble GPIbα in stored platelets. Considering the high levels of shed GPIbα in long stored platelets whether the transfusion of such products might be associated with defective adhesive function of platelets or possible proinflammatory effects could be of interests for future investigation.