بررسي پلي‌مورفيسم ژن Spa در ايزوله‌هاي باليني و ناقلين نازال استافيلوكوكوس اورئوس

Study of polymorphism spa gene (encoding protein A) of Staphylococcus aureus in clinical isolates and nasal carriers

زمينه و هدف: پروتيين A يك جزو اصلی در ديواره‌ی سلولی استافيلوكوكوس اورئوس است كه آناليز توالی نوكلئوتيدها در ناحيه x ژن spa كد‌كننده پروتيين A نشان داد اين ناحيه از 24 جفت باز تكراری تشكيل شده كه دارای پلی‌مورفيسم بالايی است. در اين مطالعه الگوهای ژن spa استافيلوكوكوس اورئوس جدا شده از بينی پرسنل و نمونه‌های بالينی مورد بررسی قرار گرفت. روش بررسی: در مجموع 200 نمونه بالينی از بيماران بستری و سواپ بينی از كاركنان بيمارستان‌های آموزشی دانشگاه علوم پزشكی همدان از مهر 1392تا مرداد 1393 جمع‌آوری گرديد. بعد از تاييد سويه‌های جدا شده، بررسی حساسيت آنتی‌بيوتيكی به‌روش ديسك ديفيوژن با توجه به دستوركار Clinical and laboratory standards institute (CLSI) و شناسايی ژن mecA سويه‌های Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) و spa (كد‌كننده پروتيين A) با روش PCR انجام شد. محصولات PCR با روش Polymerase chain reaction- restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) و آنزيم Rsa I (Afa I) برش خوردند. يافته‌ها: سويه‌ها MRSA به‌ترتيب بيشترين حساسيت و مقاومت را به كليندامايسين و سيپروفلوكساسين داشتند. در مجموع هشت محصول PCR، با اندازه‌های مختلف برای ژن spa شناسايی شد كه پس از برش آنزيمی 9 الگو به‌دست آمد كه برخی از اين الگوها در ايزوله‌های جدا شده از بينی پرسنل و نمونه‌های بالينی مشترك بودند. نتيجه‌گيری: الگوهای مشابه ژن spa در بيماران بستری و كاركنان بيانگر اين مطلب است كه يك منبع عفونت مشترك در چرخش و انتقال از فرد به فرد در بيمارستان است. تجزيه و تحليل اين الگوها می‌تواند انتقال عفونت در ميان كاركنان و بيماران بستری در بيمارستان‌ها را كاهش داد و همچنين در درمان‌های دارويی می‌تواند به پزشكان و بيماران كمك كند.

Background: Staphylococcus aureus is the most important cause of nosocomial infections acquired in the community. Protein A is a major component of Staphylococcus aureus cell wall. In analysis of the nucleotide sequence Protein A encoding spa, locus x consists of 24 base pairs which repeat with high polymorphism. In this study, the spa gene of Staphylococcus aureus isolated from clinical specimens were obtained from patients admitted to the hospital and healthy carriers. Methods: In a cross-sectional study, a total of 200 samples were collected. One hundred fifty samples were obtained from hospitalized patients and 50 samples obtained from staff nasal swabs in Hamadan University Hospitals from October 2013 to August 2014. Disk diffusion antibiotic susceptibility tests performed. The antibiotics studied were Vancomycin (30 µg), Cefoxitin (15 µg) Gentamicin (10 µg), Tetracycline (30 µg), Trimethoprim/sulfamethoxazole (25 µg), Ciprofloxacin (5 µg), Erythromycin (15 µg), Clindamycin (2 µg), Rifampin (5 µg). The tests performed according to the guidelines of clinical and laboratory standards institute (CLSI). It also detect the mecA gene of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains (MRSA) and genes spa which encodes the protein A by polymerase chain reaction (PCR). The PCR products using a polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method with enzyme Rsa I (Afa I) were prepared. Results: This methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain (MRSA) had the highest sensitivity and resistance to ciprofloxacin and clindamycin. Totally, 8 amplicon with different sizes for the spa gene were identified. A total of 9 patterns polymerase chain reaction- restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) were found. Some of these patterns between Staphylococcus aureus isolated from clinical specimens and nasal carriers were common. Conclusion: There is a similar pattern of spa gene among patients admitted to the hospital and staff, according to our findings. Analysis of the patterns can reduced transmission of infection in both hospital staff and patients. Also it can help the physicians for correct management of infections.